Reassessment of DNA content values for reference standards internationally used in genomic quantification of plants / Reavaliação dos valores de conteúdo de DNA dos padrões de referência internacionalmente utilizados em quantificações genômicas de plantas

AUTOR(ES)

Milene Miranda Praça

DATA DE PUBLICAÇÃO

2009

RESUMO

A aplicação das técnicas de citometria de fluxo (CF) e de imagem (CI) tem possibilitado a caracterização de genomas de várias espécies. Esses trabalhos vêm fornecendo relevantes informações a estudos evolutivos, moleculares e para o melhoramento de plantas. Para que uma espécie tenha seu DNA mensurado, necessita-se de padrões de referência que tenham seu conteúdo de DNA bem estabelecido. No entanto, observa-se na literatura que esses padrões apresentam diferentes valores de DNA. Isto tem gerado mensuramentos errôneos do genoma de várias espécies vegetais. Considerando a necessidade de obter padrões com valor 2C de DNA estabelecido para análises citométricas em plantas, em virtude das discrepâncias de valores citados na literatura para uma mesma espécie, o presente estudo teve como objetivo reavaliar os valores de conteúdo de DNA de alguns dos principais padrões de referência utilizados internacionalmente. Para tanto, as espécies Raphanus sativus L., Solanum lycopersicum L., Glycine Max (L.) Merr., Zea mays L., Pisum sativum L., Vicia faba L. e Allium cepa L. foram comparadas citometricamente entre si e com espécies que possuem o genoma seqüenciado: Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. e Drosophila melanogaster. Meig. A obtenção de CVs abaixo de 4,46% e 4,97% evidenciou que as metodologias de CF e CI, respectivamente, foram adequadamente aplicadas. Inicialmente, comparou-se por CF as plantas padrões duas a duas, do menor para o maior conteúdo de DNA, e observou-se que a quantidade de DNA mensurada foi diferente da quantidade previamente descrita. Após realizar essas comparações, calculou-se o conteúdo de DNA para todos os padrões, com base no índex, utilizando cada um desses como um padrão de referência primária. Os valores encontrados também foram diferentes dos valores descritos previamente. No entanto, por análise multivariada, observou-se uma proximidade com os valores de referência da literatura. Quando os dados foram comparados com os resultados obtidos pelos quatro laboratórios pesquisados por Dolezel et al (1998), observou-se que formaram agrupamentos os laboratórios que utilizaram o mesmo padrão primário ou a mesma metodologia. Quando comparou-se apenas os valores de DNA obtidos no presente estudo, observou-se, pelo teste de Dunnett, que os padrões R. sativus e também D. melanogaster proporcionaram o maior número de diferenças em relação aos valores de referência. Esses resultados foram confirmados com os dados da CI. As outras espécies proporcionaram o mesmo número de igualdades. Sendo assim, esses novos valores obtidos, principalmente com A. thaliana, espécie que teve seu DNA seqüenciado, poderiam formar um grupo de Gold standard para plantas.

ASSUNTO(S)

valor 2c quantificação de dna image cytometry citometria de fluxos 2c values dna amounts genetica vegetal flow cytometry citometria de imagem

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