Purificação de MPB70 recombinante e aplicação em testes de diagnóstico para a tuberculose bovina

AUTOR(ES)

Elizabeth Fonseca dos Reis

DATA DE PUBLICAÇÃO

2004

RESUMO

Mycobacterium bovis AN5.O fragmento amplificado dói usado em sistema de expressão empregando procariotos.No ELISA indireto desenvolvido utilizando-se a MPB70r produzida na fase solida foi verificada reação com anticorpo monocional anti-MPB70 e com soros de bovinos reagentes a tuberculinização, não reagindo com soros bovinos com paratuberculose e bovinoss sensibilizados com Myconbacterium avium.Os resultados obtidos foram comparados aos resultados da tuberculinizacao e mostraram especificidades 99% e sensibilidade relativa baixa,pois o tipo de respostas imunológica medida pelos dois testes é diferente.Porém a sensibilidade do teste aumentou 92 % quando o mesmo foi utilizada em paralelo com a tuberculinização sem alteração da especificidade.A fim de produzir materiais alternativos como suporte para ensaios imunológicos foram sintetizados e caracterizados quimicamente por espectroscopia na região do infravermelho por transformada de Fourier(FTIR) hidrogéis com base polimérica de álcool polivilico(PVA) /Glutaraldeido(GA) e híbridos contendo GA e/ou tetraetil ortossilicato (TEOS) adsorvidos ou não da proteína MPB70 recombinante (MPB70r).Os espectros FTIR dos dispositivos mostraram as regiões de absorção das ligações químicas especificas do PVA e do GA confirmando a formação do hidrogél de PVA + GA.As ligações químicas que confirmaram a formação dos híbridos PVA+TEOS e PVA +GA_TEOS estavam presentes nos picos referentes às regiões de absorção das ligações dos grupos característicos do PVA,GA e do TEOS.Já nos dispositivos que sofreram adsorção direta da MPB70r foram identificados por /FTIR os agrupamentos específicos e os picos referentes às ligações das amidas 1,2 e 3,ligações estas normalmente encontradas nas estruturas das proteínas ,confirmando que houve adsorção protéica nos dispositivos.Com os dispositivos adsorvidos com a MPB70r foi realizado um teste de imunoensaio,ELISA,para a detecção de anticorpos contra esta proteína em soros de bovinos reagente a prova de tuberculinização .Simultaneamente o mesmo ensaio foi realizado em placas de polietileno,próprias para ensaios de ELIZA,a mesma proteína foi adsorvida e os mesmos soros testados.

ASSUNTO(S)

bovino doenças teses. tuberculose em bovino diagnóstico teses. teste tuberculínico teses.

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