Purificação de lipase de Geotrichum sp. por resina cromatografica de interação hidrofobica : modelagem, simulação e validação de parametros

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DATA DE PUBLICAÇÃO

1999

RESUMO

As lipases (EC 3.1.1.3) são um grupo de enzimas com diversas aplicações na indústria farmacêutica, de química fina, óleoquímica e alimentar. Estas enzimas ocorrem em animais e plantas e podem ser produzidas por microrganismos como fungos e bactérias. A recuperação e purifica São destas enzimas para serem utilizadas como biocatalisadores têm sido feita por diferentes métodos, entre eles, a cromatografia. O presente trabalho trata sobre a produção e purificação de lipase do fungo Geotrichum sp. A produção de lipase foi realizada em meio complexo composto por água de maceração de milho (5%), nitrato de amônio (0,5%) e óleo de oliva (1 %), obtendo-se valores elevados de atividade lipolítica em tomo de 20 U/mL. A recuperação da lipase presente no caldo de fermentação foi feita com Butyl Sepharose. As condições mais adequadas para a adsorção de lipase na resina hidrofóbica foram concentração de cloreto de sódio 2M e pH 7, sendo a eluição efetuada com tampão fosfato de sódio 10 mM, pH 7. Estudou-se a cinética de adsorção e foram determinadas as isotermas de adsorção a diferentes concentrações de cloreto de sódio, na faixa de 0,5M a 2M, obtendo-se as constantes cinéticas Qm e k1 através do ajuste dos valores experimentais à equação de Langmuir. Os valores das constantes kl e k2 (kd=k21k1) foram obtidos por ajuste dinâmico utilizando o método de Runge-Kutta de 4a ordem. As constantes cinéticas foram utilizadas para simulação de curvas de ruptura, que foram comparadas com curvas de ruptura experimentais obtidas por injeção do caldo bruto de fermentação contendo diferentes teores de cloreto de sódio, em coluna cromatográfica de Butyl Sepharose montada num FPLC. O grau de ajuste entre as curvas experimentais e as simuladas foi bom. Finalmente, foi realizada a simulação e a otimização do processo CARE ("Continuous Adsorption Recycle Extraction"), utilizando as constantes cinéticas de adsorção da lipase sobre Butyl Sepharose determinadas experimentalmente, obtendo-se faixas de operação que permitem ter rendimento (recuperação da enzima) em torno de 60% e fator de purificação de 14 vezes, mas o fator de concentração é baixo. Estes resultados indicam o potencial de aplicação do processo para purificação de lipase

ASSUNTO(S)

analise cromatografica adsorção

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