PRODUÇÃO, PURIFICAÇÃO PARCIAL E CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA DE GLUCOAMILASE DE Aspergillus niger OBTIDA POR FERMENTAÇÃO EM ESTADO SÓLIDO

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

A glucoamilase, enzima normalmente produzida por fungos filamentosos, é uma das principais responsáveis pela hidrólise do amido para a formação de xarope de glucose, matéria-prima utilizada pela indústria de alimentos na produção de refrigerantes, sorvetes, molhos, pães e como fonte de carbono em fermentações. No presente trabalho, a glucoamilase foi produzida por Aspergillus niger através de fermentação em estado sólido, utilizando como substrato resíduo de uma indústria de processamento de batata, por um período de 48 horas a 32 C. A caracterização bioquímica da preparação enzimática bruta mostrou como faixa de pH ótimo para atuação, valores próximos a 5,0 e temperatura ótima 60 C, com atividade média de 11,87. Ensaios de estabilidade térmica indicaram que após 26 horas de incubação a glucoamilase manteve 58,75 (9,70 e 60,33 (9,96) de sua atividade a 35 C e 60C respectivamente. Ensaios de pH mostraram como o de maior estabilidade 4,6, no qual após 28 horas obteve-se 72,87 (8,88) de atividade residual. Os parâmetros cinéticos para a hidrólise do amido solúvel foram Km = 1,68 e = 41,15 . A enzima foi parcialmente purificada através de i) precipitação com sulfato de amônio entre 60-85 de saturação, ii) cromatografia de troca aniônica em Q-Sepharose e iii) cromatografia de filtração em gel em Sephadex G-100 com um fator de purificação de 109,23 vezes e rendimento de 11,71 As análises eletroforéticas estimaram a massa molecular da glucoamilase estudada em torno de 130,88. Após ser submetida às etapas de purificação, a enzima manteve as condições ótimas de pH entre 4,5 e 5,0 e de temperatura 60C, com atividade média de 152,85. Com relação à estabilidade, após 4 horas de incubação em pH 5,0, a glucoamilase apresentou 83 (124,99) de atividade enzimática residual e após 8 horas no mesmo pH apenas 22,72 (34,22). Foram testadas e encontradas como temperaturas de estabilidade 15 e 35C, remanescendo após 24 horas de incubação 85 (127,77) e 87 (131,14) da capacidade catalítica, respectivamente. Os valores de Km e Vmáx para a glucoamilase parcialmente purificada foram 0,049e 163,93.

ASSUNTO(S)

caracterização bioquímica purificação glucoamilase glucoamylase fermentação em estado sólido purification aspergillus niger biochemical characterization engenharia de alimentos aspergillus niger solid-state fermentation

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