Produção de hibridomas e clones para obtenção de anticorpos monoclonais anti-Neospora caninum Nc-1 (Apicomplexa, Sarcocystidae) / Production of hybridomas and clones to obtain monoclonal antibodies anti - Neospora caninum Nc-1 (Apicomplexa, Sarcocystidae)
AUTOR(ES)
Bruna Alves Devens
DATA DE PUBLICAÇÃO
2009
RESUMO
O Neospora caninum é um protozoário apicomplexa com implicação em abortamentos em muitos países. Estão inclusas nas perdas econômicas, os abortamentos, a proporção de vacas descartadas e a reposição de novos animais no rebanho, a queda na produção leiteira, bem como na produção de gordura no leite. Sabe-se que os kits diagnósticos existentes no mercado são de alto custo e não são produzidos no mercado nacional, necessita-se, oferecer alternativas de diagnóstico confiáveis, e rápidas, com tecnologia nacional. A proposta do presente trabalho foi a produção de anticorpos monoclonais (AcM) de alta afinidade contra o Neospora caninum (amostra Nc-1), para a utilização em testes de imunodiagnóstico como imunofluorescência, imunoistoquímica, ELISA e dot-ELISA. Para a produção dos AcM usou-se o protozoário sonicado, proveniente da cultura em células VERO e foi purificado por filtração, utilizaram-se os taquizoítos para a imunização dos camundongos BALB/c, usando como adjuvante a saponina, o que permitiu a obtenção de anticorpos policlonais. A fusão das células esplênicas, provenientes dos camundongos imunizados, com as células de mieloma SP2/0 resultou na obtenção de 72,4% de hibridomas secretores de anticorpos anti-Nc-1. Após a clonagem por diluição limitante obteve-se 78,2% dos clones secretores de anticorpos anti-Nc-1. Após a reclonagem por diluição limitante, foram obtidos 4 clones secretores de AcM da classe IgG. Os AcM IgG2a obtidos foram capazes de revelar as proteínas de massa molecular 25 kDa e 70 kDa por western blotting e inibirem a multiplicação dos taquizoítos em células VERO. Os anticorpos monoclonais produzidos poderão ser usados no desenvolvimento de testes mais sensíveis para estudos epidemiológicos da neosporose ou poderão ser utilizados na identificação de proteínas relevantes para o desenvolvimento de vacinas.
ASSUNTO(S)
neospora caninum patologia animal monoclonal antibodies neospora caninum anticorpos monoclonais
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