Pre-isolation, isolation and regeneration protoplasts from leaf mesophyll of in vivo Malus domestica ‘Anna’ cv.

AUTOR(ES)
FONTE

Rev. Bras. Frutic.

DATA DE PUBLICAÇÃO

05/08/2019

RESUMO

Resumo Protoplastos in vivo do mesofilo foliar da cultivar de macieira “Anna” foram isolados de folhas com 15 dias de idade através de plasmólise em meios contendo manitol a 90 g L-1, por meia hora e em seguida a 130 g L-1, pelo mesmo tempo. Anteriormente ao isolamento dos protoplastos foi realizado um pré tratamento com mistura enzimática contendo 1.5 % celulase + 0.5 % pectianase + 1.5 % Macrozyme, a fim de identificar e reduzir compostos fenólicos os quais, durante o ano, estimulam o isolamento de protoplastos. Diversos outros fatores também foram estimados usando as técnicas de isolamento, como por exemplo, pressão osmótica, período de incubação, tamanho do poro da peneira, período de centrifugação e balanço hormonal. A quantidade de células foi calculada por quadrado no hemocitômetro. Um rendimento consideravelmente maior de formação de protoplastos foi observado no meio CPW utilizando um tamanho de poro de 25 µm com período de incubação de 20 horas. Além disso, obteve-se a melhor regeneração de protoplastos com a utilização da densidade de protoplastos de 2.0 x 105 em meio MS suplementado por 1,0 mg L-1NAA e 0,3 mg L-1BAP. Acreditamos que nosso protocolo pode incentivar a recuperação da planta através da utilização de programas de hibridização somática em macieiras.Abstract To isolate protoplast, a pre-treatment was completed with the order to reduce and identify the phenolic contents round the year to encourage the isolation of protoplasts. Protoplasts from in vivo mesophyll leaves of apple cultivar “Anna” was isolated from 15 days old leaves by plasmolying in medium containing 90 g L-1 mannitol for half hour, then 130 g L-1 mannitol for half hour. Then using enzymatic mixture involving (1.5% cellulase + 0.5% pectianase + 1.5% Macrozyme) Prior to isolation. Anyhow, diverse factors, for example, Osmotic pressure, incubation period, sieve pore size, centrifugation period and hormonal balance was estimated using the techniques for isolation. The quantity of cells was computed as the quantity of cells per square on haemocytometer. A considerable higher yield of protoplast formation was noted in the CPW medium using a pore size of 25 µm with using incubation period for 20 hours. Moreover, the best protoplast regeneration with using of protoplast density of 2.0 x 105 in MS medium supplemented by 1.0 mg L-1NAA and 0.3 mg L-1BAP. We believed that our protocol might encourage the plant recovery using in apple somatic hybridization programs.

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