PCR fluorescente associada à eletroforese capilar como ferramenta de diagnóstico de bactérias no semen
AUTOR(ES)
Dias, Francisca Elda Ferreira, Nunes, Cáris Marone, Cavalcante, Tânia Vasconcelos, Castro, Andréa Azevedo Pires de, Ferreira, Jorge Luis, Garcia, José Fernando
FONTE
Ciênc. anim. bras.
DATA DE PUBLICAÇÃO
2013-09
RESUMO
Este estudo avaliou o limiar de detecção da técnica de PCR aliada à eletroforese capilar para diagnóstico da Brucella abortus em sêmen bovino. Doses inseminantes livres de patógenos foram contaminadas experimentalmente com B. abortus em escalas que variavam de 10(0) a 10(7) bactérias/mL e submetidas à extração de DNA pelo método de fenol/clorofórmio. A amplificação por PCR foi realizada utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores, previamente descritos na literatura, BF-5'gcgctcaggctgccgacgcaa3' (cromóforo FAM) e BR-5'accagccattgcggtcggta3' para B. abortus.) Os pares de oligonucleotídeos geraram fragmentos de 193 pb. Após PCR, a visualização dos fragmentos foi realizada em gel de acrilamida 8% corada pela prata e por eletroforese capilar fluorescente em equipamento automático de análise de fragmentos de DNA. A detecção de DNA de B. abortus em sêmen bovino através de eletroforese capilar fluorescente foi possível a partir de concentração de 10³ bactérias/mL, enquanto que em gel de poliacrilamida 8% o limite de detecção foi de 10(5) bactérias/mL. A eletroforese capilar demonstrou ser uma alternativa rápida, eficaz e de alta sensibilidade na detecção de DNA de Brucella em sêmen bovino, podendo ser uma valiosa ferramenta para a avaliação da sanidade do rebanho e para o controle de qualidade do sêmen produzido em centrais de inseminação artificial.
ASSUNTO(S)
brucella abortus diagnóstico eletroforese capilar pcr fluorescente sêmen bovino
Documentos Relacionados
- PCR Multiplex fluorescente para detecção de bactérias em sêmen bovino
- Eletroforese capilar acoplada à espectrometria com plasma: uma ferramenta eficiente para a especiação
- Cappilary electrophoresis as analytical tool for forensic toxicology
- Eletroforese capilar de zona
- Utilização de um monitor de vídeo como fonte de alta tensão para eletroforese capilar