OTIMIZAÇÃO DE FATORES QUE AFETAM A TRANSFORMAÇÃO GENÉTICA DE Eucalyptus saligna MEDIADA POR Agrobacterium tumefaciens
AUTOR(ES)
Oliveira-Cauduro, Yohana de, Adamuchio, Lais Gomes, Bespalhok Filho, João Carlos, Gerhardt, Isabel Rodrigues, Degenhardt-Goldbach, Juliana, Bernardes, Marianne, Quoirin, Marguerite
FONTE
Rev. Árvore
DATA DE PUBLICAÇÃO
22/02/2018
RESUMO
RESUMO Esse trabalho teve como objetivo avaliar o efeito de vários fatores que podem afetar a transformação genética de explantes cotiledonares de Eucalyptus saligna mediante co-cultura com a cepa EHA105 de Agrobacterium tumefaciens. Foi utilizado o vector pBI121 carregando o gene repórter gus sob controle do promotor 35SCaMV. Foi estudado o efeito dos fatores a seguir: pré-cultura dos explantes, uso de diferentes antibióticos e presença de acetosiringona (AS) nos meios de co-cultura. Uma solução contendo ácido ascórbico (250mg.L-1), ácido cítrico (25mg.L-1) e PVP-40 (1g.L-1) foi utilizada no momento da excisão dos explantes. A pré-cultura dos explantes antes da co-cultura com a bactéria foi de 4 dias, em meio de cultura MS suplementado de 4,4µM BAP e 2,7ìM ANA. Após a co-cultura três concentrações de canamicina (12,5; 25 e 50mg.L-1) combinadas com 300mg.L-1 de Augmentin® no meio de cultura foram testadas. O efeito do Augmentin® (300mg.L-1) nos explantes foi comparado ao da cefotaxima (500mg.L-1), em meio contendo 50mg.L-1de Km. Foi concluído que Augmentin® estimula a organogênese, em comparação com a cefotaxima, que a concentração de 12,5mg.L-1 de Km permite a seleção de explantes transformados com o gene gus e, finalmente, a adição de AS (50ìM) aos meios de co-cultura líquido e sólido tem efeito positivo sobre a expressão do gene gus. O uso de antioxidante não é necessário e a pré-cultura dos explantes antes da inoculação com A. tumefaciens não tem efeito na regeneração de gemas nem na expressão do gene gus. A eficiência de transformação foi de 1,5%.
ASSUNTO(S)
acetosiringona antibiótico canamicina
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