Lipossomas ph-sensíveis contendo complexo de ciclodextrina catiônica/DNA plasmidial:: otimização do método de preparo, caracterização físico-química e estudo de transfecção

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

08/07/2011

RESUMO

Dentro do grupo dos vetores não virais, os lipossomas pH-sensíveis constituem uma alternativa interessante para ser utilizada na terapia gênica, pois em pH ácido, como ocorre no interior dos endossomas sofrem transição de fase, que conduz à desestabilização da bicamada lipídica, promovendo, assim, a liberação do material genético encapsulado. Este trabalho apresenta o desenvolvimento e a caracterização físico-química de lipossomas pH-sensíveis, compostos por DOPE:CHEMS (razão molar 6:4, respectivamente), contendo o plasmídeo pAct - capaz de expressar o gene da proteína activina, com propriedade de reduzir o crescimento celular do câncer de próstata. Estes lipossomas denominados LpAct foram produzidos pelo método de evaporação em fase reversa, após prévia complexação do plasmídeo pAct com moléculas da 6-monodesoxi-6-monoamina-- cyclodextrina (Am--CD+), na razão de carga Am--CD+/pAct- igual a +1/-1. O experimento fatorial completo 24 foi utilizado para avaliar a influência dos fatores velocidade de rotação, intensidade de vácuo, concentração de lípides e concentração de pAct sobre o teor de encapsulação de pAct nos lipossomas. Este estudo foi conduzido com o intuito de se estabelecer um protocolo de produção de LpAct de uma maneira racional. Dos fatores analisados, a intensidade do vácuo e a concentração do plasmídeo pAct foram os que mais influenciaram o aumento do teor de encapsulação de pAct nos lipossomas. De acordo com o estudo fatorial, o protocolo de produção de LpAct adotado para a otimização do teor encapsulado de pAct foi: o uso da velocidade de rotação a 120 rpm, da intensidade de vácuo a 300 mbar, concentração de lípides de 10 mM e concentração do plasmídeo pAct de 30 g/mL. O teor de pAct encapsulado com este protocolo foi cerca de 85% (25 g/mL). A técnica de difração de raios X dispersiva em energia (EDXD) foi utilizada para investigar a organização supramolecular das moléculas do DOPE em relação à presença do complexo Am--CD+/pAct, dos componentes do meio de cultura e das proteínas do soro fetal bovino, nos pH 7,4 e 5,0. Em pH fisiológico, o estudo revelou que o complexo Am--CD+/pAct interage com a membrana lípidica dos lipossomas resultando na presença das fases lamelar e hexagonal. Entretanto, em pH 5,0, somente a fase hexagonal foi observada. Nos valores de pH 5,0 e 7,0, a presença dos constituintes do meio de cultura e das proteínas conduziu à formação de estruturas menos ordenadas, no entanto, a pH-sensibilidade do sistema foi preservada. O método MTT foi utilizado para avaliar a citotoxicidade dos LpAct sobre a linhagem de células de câncer de próstata LNCaP. A capacidade de transfecção dos lipossomas nestas células foi investigada mediante a expressão da proteína verde fluorescente (EGFP). O estudo contemplou a avaliação dos tempos de transfecção de 4, 6, 24 e 48 horas e a presença ou não de soro fetal bovino. De acordo com os resultados os LpAct foram capazes de transfectar as células LNCaP, porém de forma menos eficiente que o agente de transfecção catiônico utilizado como controle (Lipofectamina 2000).

ASSUNTO(S)

terapia gênica teses. lipossomos teses. transfecção teses. câncer tratamento teses. tecnologia farmacêutica teses. farmácia teses.

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