Internal control in PCR for Mycobacterium tuberculosis: usefulness and improvement of the diagnosis
AUTOR(ES)
Cortez-Herrera, Elizabeth, Sperhacke, Rosa Dea, Becker, Daniela, Kritski, Afrânio, Zaha, Arnaldo, Rossetti, Maria Lucia Rosa
FONTE
Brazilian Archives of Biology and Technology
DATA DE PUBLICAÇÃO
2008-08
RESUMO
A PCR do elemento IS6110 para diagnóstico da Tuberculose (TB) é muito utilizada em laboratórios de pesquisa. As suas limitações incluem, a inibição da enzima Taq DNA Polimerase. A seguir descrevemos a construção de um Controle Interno (IC) e ensaios de detecção da inibição da PCR para M. tuberculosis. O IC é um fragmento de DNA de 600 pb com os mesmos sítios de anelamento do primer, permitindo a amplificação com o fragmento diagnóstico de 245 pb. As amostras positivas fornecem um padrão de bandas referentes ao IC (664 pb) e ao fragmento diagnóstico (245 pb), e as amostras negativas apresentam apenas o fragmento correspondente ao IC. 149 amostras com diagnóstico conhecido foram analisadas por PCR introduzindo o IC em todas elas. Os resultados mostraram 3.3% de amostras sem amplificação do IC sugerindo inibição. Estas amostras quando testadas novamente mostraram resultados concordantes com os resultados clínicos. O objetivo do IC e identificar os falsos resultados negativos.
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