Interação do cininogênio humano de alta massa molecular com a superfície celular: envolvimento dos processos de endocitose e proteólise / High molecular weight human kininogen interact with cell surface: Involvement endocytosis and proteolysis process

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2010

RESUMO

A angiogênese e a hemostasia estão entre as mais consistentes respostas do hospedeiro associadas ao câncer, e essas duas vias interrelacionam-se, com a coagulação sanguínea e a fibrinólise influenciando a angiogênese tumoral diretamente e contribuindo com o crescimento do tumor. O fato dos tumores serem dependentes do suprimento sanguíneo tem inspirado muitos pesquisadores a procurarem por moléculas antiangiogênicas e desenharem estratégias antiangiogênicas ao tratamento do câncer. O sistema calicreína-cinina plasmático está relacionado à biologia vascular e interage com os sistemas da coagulação, fibrinólise, complemento e renina-angiotensina, regula a pressão sanguínea local pela liberação de bradicinina (BK) e apresenta atividades antitrombóticas e pró-fibrinolíticas. O cininogênio de alta massa molecular (HK) apresenta duas faces no processo de angiogênese, pois a BK é pró-angiogênica e o HK de duas cadeias e livre de cinina (HKa) é antiangiogênico Os proteoglicanos de heparam sulfato (PGHS) podem atuar como constituintes estruturais de matriz, e aqueles presentes na superfície celular podem participar de processos como a endocitose e a captação vesicular, regulando o movimento de moléculas entre os compartimentos intra e extracelulares. Muitas classes de vesículas endocíticas contribuem de modo variável na atividade endocítica total, dependendo do tipo celular e das condições de crescimento do meio. As vias de sinalização regulam a atividade de todos os processos celulares. Os sistemas efetores incluem fatores de transcrição que controlam a expressão gênica, o aparato de secreção regulada, as enzimas metabólicas, os elementos estruturais e motores do citoesqueleto, os receptores de superfície celular, as proteínas reguladoras do ciclo celular e os canais iônicos de membrana. Várias vias de sinalização convergem sobre todos esses sistemas efetores. A integração de diversos sinais determina o comportamento celular, ou seja, se a célula secreta, move, cresce, divide ou diferencia. O objetivo geral proposto no projeto foi estudar a interação do HK com a superfície de células epiteliais derivadas de epitélio de mama humana e CHO. Os objetivos específicos foram estudar a possibilidade de endocitose do HK, seu processamento e atividade, em células não metastáticas comparando a células metastáticas. No presente estudo utilizando as linhagens CHO-K1 e CHO-745 confirmamos o papel desenvolvido pelo PGHS na endocitose dependente de ATP, e mediada por cavéola, do HK ligado à superfície celular e direcionado aos endossomos; verificamos a ação de enzimas das classes serino e cisteíno-proteases na liberação de cininas na superfície celular em pH 7,35 de ambas as linhagens CHO-K1 e CHO-745; ambos BK e PGHS são importantes na endocitose do HK; em ambas as linhagens, na ausência de Zn2+ e na presença de soro 2% ou 10%, o HKa exerce ação proliferativa, e a presença de glicosaminoglicanos influencia na ação do HK sobre a proliferação das CHO-K1. A interação do HK ou HKa foi avaliada em linhagens celulares de epitélio mamário com diferentes graus de metástase. As MCF-10A (não metastáticas) interagem mais com ambos HK e HKa comparadas a ambas as linhagens tumorais, possivelmente pelo maior conteúdo de condroitim sulfato presente na superfície das células tumorais; a relação BK liberada no sobrenadante comparada à BK internalizada é maior em células MDA-MB-231 (alto grau de metástase). Na ausência de Zn2+, e na presença soro 2% ou 10%, em 24 h, o HKa aumenta a proliferação em MCF-10A e MCF-7 (pouco metastáticas), e em 48 h a proliferação diminui em MCF-7; em MDA-MB-231 ambos HK e HKa diminuem a proliferação e a presença de soro reverte os efeitos de ambos em 24 h, e em 48 h apenas o HK diminui a proliferação na presença de soro 2%. Em MCF-7 ocorre o aumento na expressão de Akt em relação às células não tratadas (controle), exceto em células tratadas com HKa em 48 h, ocorre a presença constante de ERK1/2, e o aumento na expressão de c-Myc em relação às células não tratadas (controle); em MDA-MB-231 há o aumento na expressão de Akt por HK, ou seus fragmentos, e HKa em 24 h; apesar de p-38 estar presente nestas células, o HK, ou seus fragmentos, e HKa promovem alterações na expressão de p-38 de maneira semelhante na presença de soro 2% ou 10%. As MDA-MD-231 migram sob ação tanto de HK quanto HKa, na presença de soro 2% ou 10% e na ausência de zinco. O presente estudo confirma a participação do PGHS na internalização de HK/HKa associados à superfície celular e fusão com endossomos; a ação de enzimas das classes serino e cisteíno-proteases na liberação de cininas nos sobrenadantes celulares em pH 7,35; a importância de ambos BK e PGHS na endocitose do HK; o envolvimento de cavéolas presentes em microdomínios de membrana na endocitose e sugere a importância dos íons zinco nos processos de proliferação relacionados com a participação de uPAR ou suPAR. Os estudos de sinalização celular abrem perspectivas à avaliação do ciclo celular sob a ação de HK/HKa.

ASSUNTO(S)

glicosaminoglicanos cininogênios bradicinina células cho células mcf-10a, mcf-7 e mda-mb-231 biologia molecular

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