Influência das condições de cultivo na produção de antígenos recombinantes de Leishmania i. chagasi utilizando Escherichia coli M15 cultivada em incubador rotativo e biorreator

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

29/12/2011

RESUMO

A Escherichia coli é um dos hospedeiros mais utilizados para produção de proteínas recombinantes tanto em escala de laboratório como em escala industrial desde o advento da tecnologia do DNA recombinante. Apesar do avanço expressivo dos estudos da biologia molecular e da imunologia das infecções, não existe, atualmente, nenhuma droga profilática capaz de prevenir o calazar. Desta forma, existe uma grande necessidade de identificação de antígenos específicos para o desenvolvimento de vacinas e kits para diagnósticos contra a Leishmaniose visceral. Com base no exposto, o presente trabalho tem como foco principal avaliar a influência das condições de cultivo na produção dos antígenos de Leishmania i. chagasi em cultivos realizados em incubador rotativo e biorreator. Para atingir o objetivo proposto, vários ensaios foram realizados a fim de se avaliar o comportamento cinético dos clones (648, 503) de Leishmania i. chagasi em duas diferentes composições de meio (2xTY, TB), com e sem adição de indutor em incubador rotativo. Para melhorar a expressão, ensaios foram conduzidos em biorreator de bancada com as melhores condições obtidas em incubador rotativo, além da avaliação da influência da velocidade de agitação. Com base nos resultados obtidos, pode-se observar que a elevada complexidade do meio de cultivo favoreceu a cinética de crescimento dos clones (648, 503), no entanto, ao se tratar dos ensaios submetidos ao procedimento de indução por IPTG, a elevada complexidade do meio de cultivo não favoreceu a expressão das proteínas recombinantes. Pode-se observar que a expressão dos antígenos 648 e 503 apresentam um comportamento associado ao crescimento e que em termos de localização, as proteínas 648 e 503, são armazenadas intracelularmente. A lactose pode ser o indutor mais adequado na expressão das proteínas tendo em vista os fatores, custo, toxicidade e estabilidade. A elevada agitação pode aumentar o crescimento celular do clone 503, entretanto, pode não acarretar em altas concentrações da proteína de interesse. Por outro lado, foram obtidos resultados positivos para todos os clones recombinantes (648, 503) testados, confirmada através do perfil eletroforético

ASSUNTO(S)

indução escherichia coli recombinante leishmania chagasi engenharia quimica induction recombinant escherichia coli leishmania chagasi

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