Influence of glycosaminoglycans on plasma kallikrein-kinin system proteins interaction with cell surface. / Influência dos glicosaminoglicanos na interação das proteínas do sistema calicreína-cinina plasmático na superfície celular.

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2006

RESUMO

O sistema calicreínas-cininas é composto pelos cininogênios de baixa e alta massa molecular (LK e HK), as calicreínas tecidual e plasmática, e foi primeiramente reconhecido como um sistema proteolítico plasmático e tecidual responsável pela liberação de bradicinina (BK). A principal função dos cininogênios tem sido descrita como precursores de BK, um peptídeo que não é ativo ao menos que seja liberado dos cininogênios. O sistema calicreína-cinina plasmático está relacionado à biologia vascular, e está envolvido e i terage com diferentes sistemas, tais como os sistemas da coagulação, fibrinólise, complemento e renina-angiotensina.O HK é uma proteína que apresenta multidomínios com atividades anti-trombótica, anti-adesiva e prófibrinolítica. Recentes estudos têm revelado que o HK livre de BK (HKa) inibe a angiogênese enquanto a BK promove a angiogênese. Nas células sangüíneas e vasculares algumas diferentes proteínas têm sido descritas como receptores ligantes de HK: a integrina Mac-1 (aMb-2 ou CD11b/CD18) em granulócitos, o suposto receptor aos domínios globulares do fator do complemento C1q (p33/gC1qR), a citoqueratina-1 (CK1) e o receptor do ativador de plasminogênio do tipo uroquinase (uPAR) em HUVECs, a glicoproteína-Ib-IX-V e a trombospondina em plaquetas. Mais recentemente, ambos o heparam sulfato e o condroitim sulfato têm sido descritos como receptores putativos de HK. O objetivo do presente trabalho foi estudar a influência dos glicosaminoglicanos (GAGs) na ligação do HK na superfície e lisado celulares e o seu processamento usando dois modelos diferentes de linhagem de células obtidas a partir de ovário de Hamster Chinês, a selvagem CHO-K1 e mutada CHO-745, que é deficiente na síntese de proteoglicanos devido à perda de atividade da enzima xilosil-transferase. A ligação do HK-biotinado (b-HK) à superfície celular de CHO-K1 foi dependente de Zn2+. O nível de ligação do b-HK foi bem maior na superfície celular comparado ao lisado celular em ambas as linhagens, e esta ligação não foi revertida em CHO-K1 e CHO-745 pela adição de 20 vezes o excesso molar de HK não biotinado. A 37C os valores de Bmáx para CHO-K1 e CHO-745 são muito semelhantes, entretanto o Kdap para a ligação de HK em CHO-K1 é 4,4 vezes maior quando comparado a CHO-745 sugerindo que a presença de PGs/GAGs prejudiquem a interação do HK com outros receptores putativos presentes na superfície celular. Considerando as determinações de Bmáx a 4oC em CHO-K1 o valor é 3,0 vezes menor comparado àquele a 37C, e em CHO-745 o Bmáx a 4oC é 1,4 vezes menor comparado ao Bmáx a 37oC. A diferença nos valores de Bmáx nas duas temperaturas para cada linhagem celular sugere que o HK seja internalizado, eatravés de análise imunocitoquímica por microscopia confocal os experimentos detectaram que o HK é internalizado somente na linhagem CHO-K1. A procalicreína plasmática (PK) ligou a ambas as linhagens celulares na presença de HK; no entanto, na ausência de HK a PK apenas interage com superfície celular de CHO-K1, sugerindo que os PGs/GAGs podem interagir com PK. Uma vez que o complexo HK/PK seja formado na superfície e lisado celulares deambas as linhagens a PK é ativada a calicreína huPK e ambas a prolilcarboxipeptidase (PRCP) e as catepsinas podem participar desse processo. O HK íntegro associado à superfície e ao lisado celulares de ambas as linhagens foi hidrolisado na ausência de PK/huPK em uma ligação peptídica, e os resultados obtidos indicam a possibilidade de que essa enzima seja a PRCP ou uma calicreína tecidual nas condições do ensaio. A interação das proteínas do sistema calicreína-cinina plasmático com a membrana celular, através da sua ligação e internalização, pode resultar na liberação de fragmentos de HK e na atividade de huPK pericelular as quais podem influenciar em processos fisiológicos e patológicos.

ASSUNTO(S)

biologia molecular 1. glicosaminoglicanos. 2. cininogênios. 3. calicreína plasmática. 4. cho.

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