In situ DNA fragmentation during the re-establishment of desiccation tolerance in germinated seeds of Cedrela fissilis Vell.

AUTOR(ES)
FONTE

J. Seed Sci.

DATA DE PUBLICAÇÃO

01/07/2019

RESUMO

Resumo: A desidratação é um procedimento necessário antes de expor as sementes ao armazenamento a longo prazo, mas isso está associado à lesão ligada ao metabolismo mediada por lesão celular. A fim de avaliar as alterações celulares durante o restabelecimento da tolerância à dessecação (TD) em sementes germinadas de C. fissilis e sua relação com danos no DNA, verificamos a ocorrência de fragmentação do DNA através do teste de TUNEL e suas evidências por meio da análise citológica. Para restabelecer o TD, as sementes germinadas foram incubadas por 72 h em polietilenoglicol (PEG, -2,04 MPa) antes da desidratação em sílica gel (a 10% de umidade) seguida de reidratação. O teor de água foi alterado durante o restabelecimento da tolerância à dessecação. Foi utilizado o rotulador TDT-dUPT (TUNEL) para avaliar as taxas de morte celular. A coloração TUNEL foi realizada usando o teste de imagem Click-iT-TUNEL Alexa Flour. O teste TUNEL mostrou uma fragmentação de DNA consistente nas radículas com 2 e 5 mm de comprimento. Além disso, alterações nucleares e cromossômicas foram observadas no ciclo celular meristemático de 5 mm, contribuindo para a identificação de diagnósticos de marcadores de morte celular.Abstract: Dehydration is a necessary procedure prior to exposing seeds to long term storage, but this is associated with metabolism-linked injury mediated by cell injury. In order to assess cellular alterations during re-establishment of desiccation tolerance (DT) in C. fissilis germinated seeds and their relation to DNA damage, we verified the occurrence of DNA fragmentation through the TUNEL test and its evidence through the cytological analyses. To re-establish DT, germinated seeds were incubated for 72 h in polyethylene glycol (PEG, -2.04 MPa) before dehydration in silica gel (at 10% moisture content) followed by rehydration. The moisture content changes during the reestablishment of the desiccation tolerance was accomplished. (DT)TdT-dUPT terminal nick-end labeling (TUNEL) was used to assess rates of cell death. TUNEL staining was performed using Click-iT-TUNEL Alexa Flour imaging assay. The TUNEL test showed a consistent DNA fragmentation in the 2 and 5 mm long radicles. Moreover, nuclear and chromosomal alterations were observed in the 5 mm meristematic root cell cycle, contributing to the identification of diagnostic markers of cell death.

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