Imunogenicidade do veneno de Dinoponera australis (Hymenoptera, Formicidae, Ponerinae)

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

CAPITULO II: O gênero Dinoponera apresenta seis espécies, todas com distribuição pela América do Sul. Essas formigas são caracterizadas pela presença de uma glândula de veneno que é responsável pela produção de uma toxina, constituída em sua maior parte por proteínas. Este trabalho teve como objetivo a identificação de peptídeos específicos do veneno de D. australis por Phage Display. Foi utilizada biblioteca comercial de peptídeos randômicos Ph.D.-12 Peptide 12-mer Phage Display Library. Após quatro etapas de seleção, 48 clones tiveram sua seqüência de DNA determinada e foram traduzidos, gerando 26 seqüências válidas e 16 peptídeos distintos. As análises de bioinformática identificaram similaridade com ADAM metaloprotease de Culex quinquefasciatus e com uma proteína similar a fosfatase ácida de veneno encontrada em Nasonia vitripennis. ADAM metaloproteases são proteínas que atuam no controle de adesão e fusão de membrana, citocinas e fator de crescimento. Fosfatase ácida é uma das maiores enzimas lisossomais de invertebrados associada com degradação e morte celular. A atividade da Fosfatase ácida no veneno desta formiga foi feita utilizando o Kit Api Zym. O mapeamento dos componentes do veneno de D. australis, mostrou que os peptídeos analisados não apresentam similaridade com: melitina de Apis mellifera e Vespa magnifica; maior alergeno de Myrmecia pilosula; Apamin de A. melífera; fosfolipase A2 de A. melífera, mas apresentou similaridade com fosfolipase A2 de Nasonia vitripennis. Apresentou, também, similaridade com diferentes alergenos, neurotoxinas, metaloproteases, fenoloxidase e hialuronidase de diferentes himenópteros. Para analisar o efeito dos peptídeos usou se o teste edematogênico verificando que nos camundongos imunizados apresentou maior nível edematogênico com 30 minutos, sendo, portanto, mais rápido que em camundongos não imunizados. CAPITULO III: A análise dos componentes do veneno de himenópteras é uma fonte rica de informação sobre as funções e mecanismos biológicos desse veneno. É importante, também, por desencadear reações alérgicas em humanos e por apresentar aplicações terapêuticas. As citocinas são um grupo heterogêneo de mediadores celulares peptídicos associados à ativação do sistema imune e às respostas inflamatórias. Os receptores Toll-like (TLRs) são proteínas transmembranas caracterizadas por seqüências extracelulares repetidas ricas em leucina, capazes de reconhecer um amplo grupo de padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs) de diferentes espécies de microrganismos e fundamentais para a ativação da resposta imune inata. Este trabalho analisou o perfil de resposta imunológica em células sanguíneas, in vitro, estimulado por veneno de Dinoponera australis em diferentes concentrações (0.5; 1;e 3 ug) e analisou, também, o efeito das mesmas concentrações de veneno bruto na expressão do mRNA do gene TLR4 em células mononucleares de sangue periférico (PBMC) por PCR Tempo Real. Sangue humano foi obtido de doadores voluntários, coletados em tubos contendo heparina. As citocinas presentes nos sobrenadantes de cultura de sangue periférico foram dosadas por ELISA utilizando pares de anticorpos monoclonais comercialmente disponíveis. O veneno bruto em todas as concentrações analisadas estimulou significativamente a produção de IL-10 em cultura de sangue total e diminuição de TNF-α. A IL-10 tem uma alta atividade anti-inflamatória tanto nas funções de linfócitos como de monócitos. Esta citocina diminui a produção de uma série de citocinas próinflamatorias como IL1, TNF-α e IL6. Os níveis de expressão gênica do TRL4 foram determinados por PCR tempo-real e normalizados com os níveis de expressão do gene constitutivo HPRT. Houve uma diminuição significativa na expressão do mRNA do gene TLR4 em cultura de PBMC humano somente na concentração de 3μg. Esses dados sugerem que algum componente do veneno bruto dessa formiga tem efeito modulador na expressão de TLR4 e potente efeito antiinflamatório.

ASSUNTO(S)

tlr4 phage display dinoponera australis genetica venom veneno citocinas genética molecular cytokines

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