Identificação de genes diferencialmente expressos em células endoteliais obtidas pela diferenciação de células-tronco derivadas do tecido adiposo humano

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

19/08/2011

RESUMO

Há alguns anos, células.tronco foram obtidas de embriões e fetos humanos,dando início a uma nova era na área da biologia do desenvolvimento e suas possíveis aplicações médicas. Desde então, diferentes estratégias para se obter células.tronco foram descritas e, dentre estas, o isolamento de human&Adipose&Stem&Cell (hASC);as quais possuem a capacidade de se diferenciarem em várias linhagens mesenquimais,tais como células endoteliais.Contudo, ainda que algumas análises fenotípicas sejam utilizadas para comprovar tal diferenciação, para que a aplicação da terapia celular seja mais segura e eficaz, os processos genéticos que envolvem a diferenciação de células- tronco em determinadas linhagens celulares ainda não estão completamente elucidados no que se refere à expressão gênica diferencial. Nesse contexto, o objetivo desse trabalho foi o de identificar genes diferencialmente expressos em hASC induzidas àdiferenciação# endotelial.Para tanto, as células-tronco foram extraídas de produto de lipoaspirado,processadas e avaliadas por Citometria de Fluxo e por Ensaio de Fosfatas eAlcalina.Para indução à diferenciação endotelial,VEGF e bFGF, foram adicionados ao meio de cultivo e após 14 dias, análises fenotípicas foram realizadas através de Ensaio de Fosfatas eAlcalina,Citometria deFluxo e MicroscopiaConfocal. Para a identificação de genes diferencialmente expressos nas células induzidas à diferenciação, foi utilizada a técnica de Rapid&Subtractive&Hybridization&(RaSH) e posterior identificação dos genes através de seqüenciamento e validação por PCR em Tempo Real. Os resultados obtidos comprovaram o isolamento de células-tronco derivadas do tecido adiposo e a diferenciação endotelial após indução. Através da utilização da técnica de RaSH foram identificados 5 genes (ELAVL1,LAMB2,SC5DL, HARS e VEGFA), dos quais foram validados VEGFA e HARS, através de PCR em Tempo Real,com expressão de1,5 e1,78 vezesmaior doque na célula indiferenciada,respectivamente.

ASSUNTO(S)

genética teses. células tronco teses. tecido adiposo teses. células diferenciação teses. células epiteliais decs expressão gênica decs

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