Genotipagem de Mycobacterium bovis pelo multispacer sequence typing

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

02/03/2012

RESUMO

O Mycobacterium bovis, causador da tuberculose bovina, está entre as espécies pertencentes ao Complexo Mycobacterium tuberculosis. A doença causada pelo bacilo bovino constitui um grave problema devido aos prejuízos diretos causados por esta enfermidade e possíveis barreiras sanitárias na exportação. O genoma do M. bovis é >99,95% geneticamente idêntico ao de M. tuberculosis, dificultando o diagnóstico. A tipificação molecular permite inovar a identificação de uma espécie e ao mesmo tempo gerar genótipos mediante a combinação de diferentes marcadores polimórficos, contribuindo para a sua investigação epidemiológica. As técnicas mais utilizadas atualmente para tipificar o patógeno M. bovis são o Spoligotyping e o VNTR, no entanto, esses métodos não são capazes de reconhecer toda a diversidade genética dos isolados analisados como é o caso de métodos baseados em sequenciamento, que permitem a análise de sequências alvos moleculares, identificando dessa forma todos os eventos genéticos presentes no marcador utilizado. O objetivo deste trabalho foi tipificar isolados de Mycobacterium bovis pela técnica Multispacer Sequence Typing (MST). Sete regiões espaçadoras intergênicas foram analisadas para um total de 58 isolados de M. bovis relativos aos anos de 2006 a 2010, procedentes de fazendas localizadas em seis estados brasileiros (MG, GO, SP, MT, PR. RS) e para quatro amostras padrão de M. bovis. Quatro tipos de eventos genéticos foram observados: mutação de nucleotídeo único (SNP), inserção, deleção e repetição em tandem (TR), totalizando a partir da combinação dos genótipos obtidos um total de 28 eventos. Os resultados, obtidos pela comparação in silico entre os fragmentos gerados pelo sequenciamento e a cepa padrão M. bovis AF2122/97 [Genbank BX248333.1] permitiu identificar 28 perfis genotípicos únicos, caracterizando 28 sequências tipo (ST) na amostragem analisada e apontando um índice de discriminação de 93%. Esses dados foram utilizados para analisar os padrões de descendência evolutiva dos isolados de M. bovis e correlacioná-los a linhagens filogeográficas com base na formação de complexos clonais gerados a partir do eBURST. Este foi o primeiro trabalho a identificar a variabilidade dos isolados de M. bovis pelo método MST. Os resultados obtidos foram bastante satisfatórios, dado que o método permitiu tipificar e diferenciar isolados de M. bovis a partir do sequenciamento de poucas regiões espaçadoras, mesmo em localizações restritas e em um período de tempo curto como foi verificado no município de Bueno Brandão. O método apresenta a vantagem do sequenciamento e a disponibilização de sequências analisadas em bancos de dados públicos, que podem ser utilizadas por profissionais em todo o mundo como ferramenta para análises futuras.

ASSUNTO(S)

ciência animal teses

ACESSO AO ARTIGO

Documentos Relacionados