Extração de DNA a partir de coágulos sanguíneos bovinos.
AUTOR(ES)
BRITO, L. G.
FONTE
Porto Velho: Embrapa Rondônia
DATA DE PUBLICAÇÃO
2011
RESUMO
Foi otimizada uma metodologia de extração de DNA genômico a partir de coágulo sanguíneo. Amostras de sangue com e sem anticoagulante EDTA para a obtenção dos coágulos sanguíneos foram coletadas em bovinos nos estados de Rondônia e Acre para pesquisa de Anaplasma marginale. Para a extração de DNA a partir do coágulo sanguíneo testaram-se dois tipos de tecido de nylon: no tratamento 1, o tecido utilizado apresentava diâmetro dos poros de 200 µm e no tratamento 2, tecido com poros de diâmetro de 1.200 µm. As amostras de sangue com anticoagulante representaram o tratamento 3, sendo este considerado como tratamento controle. Após a quebra mecânica, os coágulos sofreram centrifugação a 7.000 RPM por 15 minutos passando através das malhas dos tecidos utilizados nos tratamentos 1 e 2. A extração de DNA das amostras a partir do coágulo centrifugado e do sangue total se deu através da utilização de kit comercial para extração de DNA genômico. A quantificação do DNA obtido foi realizada através de espectrofotometria a 260 e 280 m, sendo sua integridade verificada através de eletroforese em gel de agarose. As amostras de DNA obtidas a partir dos diferentes protocolos foram utilizadas como molde para amplificação, por PCR, do gen msp5 de A. marginale. A quantidade de DNA obtida pelos tratamentos 1 e 2 foi semelhante a do sangue total (33,39 ± 1,17; 31,76 ± 0,663; 32,35 ± 0,676, respectivamente). A pureza do DNA nas amostras obtidas a partir dos tratamentos 1 e 2 foram semelhantes a do sangue total (A260/280 = 1,61 ± 0,068; 1,58 ± 0,035; 1,63 ± 0,028, respectivamente). A utilização de tecidos de organza ou tipo filó se mostrou como uma metodologia apta a ser incorporada como método de rotina para extração de DNA a partir de coágulo sanguíneo bovino por ser uma metodologia simples, rápida, barata e reproduzível para a obtenção de quantidades consideráveis de DNA de boa qualidade para utilização em estudos de epidemiologia molecular em patologias bovinas.
ASSUNTO(S)
extração de dna coágulo sanguíneo epidemiologia molecular doenças de bovinos dna extraction blood clot molecular epidemiology bovine diseases
