Expressão heteróloga, purificação e busca de inibidores da NTPDase-1 de Trypanosoma cruzi / Heterologous expression, purification and search for inhibitors of the NTPDase-1 of Trypanosoma cruzi
AUTOR(ES)
Christiane Mariotini Moura
DATA DE PUBLICAÇÃO
2010
RESUMO
A Doença de Chagas é uma antropozoonose causada por Trypanosoma cruzi, um protozoário flagelado da ordem Kinetoplastida. T. cruzi possui em sua superfície uma ectonucleotidase denominada NTPDase-1. As ectonucleotidases da família E-NTPDases são enzimas capazes de hidrolisar nucleotídeos tri e/ou difosfatados, que podem ser degradados a nucleosídeos por outras ectonucleotidases. Os nucleotídeos extracelulares atuam como sinalizadores em vários processos celulares, como modulação da resposta imune de hospedeiros mamíferos. A hidrólise de ATP extracelular possui papel na infectividade e virulência do T. cruzi, bem como para outros parasitos, como Leishmania, Trichomonas, Toxoplasma, Entamoeba e outros. Por isso, as NTPDases são consideradas um alvo em potencial para o desenho racional de novas drogas para uso no tratamento da doença de Chagas. Neste trabalho realizamos a purificação parcial da NTPDase-1 e produzimos anticorpos policlonais contra ela. Além disso, avaliamos a estabilidade da sua atividade com relação à temperatura e tempo de armazenamento, estado de oligomerização, padronizamos um ensaio de inibição enzimática e realizamos uma triagem de análogos sintéticos de adenina como possíveis inibidores da NTPDase-1. Foi possível observar que a temperatura de armazenamento influenciou a atividade enzimática ao longo do tempo, sendo a temperatura de 4C a que melhor preservou tal atividade. A amostra protéica purificada é heterogênea, apresentando oligômeros inativos e monômeros e/ou dímeros ativos. A atividade ATPásica pode ser inibida por adenina e análogos e essa inibição parece ser do tipo competitiva.
ASSUNTO(S)
expressão heteróloga purificação busca de inibidores da ntpdase-1 de trypanosoma cruzi biologia geral heterologous expression purification search for inhibitors of the ntpdase-1 of trypanosoma cruzi
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