Expressão heteróloga e caracterização bioquímica da nucleosídeo trifosfato difosfohidrolase-2 (NTPDase-2) de Leishmania infantum chagasi / Heterologus expression and biochemical characterization of Leishmania infantum chagasi nucleoside triphosphate diphosphohydrolase-2 (NTPDase-2)

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

26/07/2010

RESUMO

A leishmaniose visceral é uma doença grave, responsável por cerca de 57 mil mortes por ano em todo o mundo, sendo a Leishmania chagasi o agente etiológico da leishmaniose visceral no novo mundo. Os parasitos do gênero Leishmania fazem parte da família Tripanosomatidae, a qual se mostra incapaz de sintetizar purinas pela síntese de novo. Acredita-se que as nucleosídeo trifosfato difosfohidrolases (NTPDases) participem do processo de captação de purinas, parte da via de salvação realizada por esses parasitos, e até mesmo modulem as respostas do sistema imune, pela hidrólise de nucleotídeos envolvidos com a sinalização purinérgica. Neste trabalho foi realizada a expressão heteróloga em sistema pET21b(+) e caracterização enzimática de uma NTPDase mapeada no genoma da espécie Leishmania chagasi, aqui denominada de LcNTPDase-2 por existir um outro parálogo (LcNTPDase-1), mais similar à isoforma TcNTPDase-1 de Trypanosoma cruzi. A enzima recombinante LcNTPDase-2 mostrou uma preferência pelos nucleotídeos GTP, UDP e ADP quando na presença de magnésio, e foi inativa na ausência deste íon e presença do cofator cálcio. Ensaios de atividade UDPásica na dependência de pH mostraram que a faixa de pH onde a enzima possui maior atividade está entre 7,0 e 8,0. Os compostos ARL 67156, suramina, molibidato de amônio, azida sódica e gadolínio foram testados como inibidores da atividade UDPásica, apresentando uma inibição de 97% na presença de 300μM de Gadolínio e 58% com 3 μM molibidadato de amônio. Ensaios para o estudo da atividade em função da presença de monômeros ou oligômeros também foram realizados e a enzima mostrou-se mais ativa quando na forma de monômeros. Grandes agregados protéicos foram observados e não exibiram atividade enzimática, porém, após a adição de 10 mM de DTT a enzima mostrou uma recuperação pequena da atividade. Existem fortes indícios de que haja uma correlação entre essa família de proteína e a virulência de alguns parasitos, como ocorre com Toxoplasma gondii e Trypanosoma cruzi.

ASSUNTO(S)

ntpdase-2 leishmaniose apirase caracterização bioquímica biologia geral (ntpdase-2) leishmaniasis apyrase biochemical characterization

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