Expressão do receptor sensor de calcio com mutações no dominio transmembrana

AUTOR(ES)

Kiara Carolina Cardoso

DATA DE PUBLICAÇÃO

2004

RESUMO

Introdução: O receptor sensor de cálcio (CASR)pertence à famíliados receptores que acoplam à proteínaG e possui homologiacom a subfamíliados receptores metabotrópicos do glutamato.Ele é importante no processo de homeostase do cálcio,e quando a concentração de cálcio se eleva,ele inibe a secreção de paratonnônio pelas paratireóidese a reabsorção renal de cálcio. O receptor sensor de cálcio possui 1078 aminoácidos, com 612 aminoácidos no domínio extracelular (Em), 250 aminoácidos em sete regiões ttansmembrana (TM) conectadas com 3 alças extracelularese intracelularese uma longa cauda intracitoplasmática com 216 aminoácidos.A região ttansmembrana tem um papel fundamental na ativação do receptor e análise da distn"buiçãodas mutações ativadoras demonstra que a sua porção distal (IM 5, 6, 7 e alça extracelular 3) é a mais crítica no processo de ativação do receptor. O estudo de receptores mutados auxilia a elucidar a imponância da polaridade de detenninados aminoácidos presentes na região ttansmembrana na expressão do CASR A produção da proteína recombinante do domínio extracelulardo CASRproporciona novas expectativaspara uma análiseestruturaldesta regiãotão importante para a ligaçãocom o agonista. Objetivos: Os objetivos do presente estudo foram: 1-investigaro grau de expressão de receptores mutados na região ttansmembrana. 2- Produzir a proteína recombinante do domínio extracelular do CASR em sistema de E.. Resultados e Conclusões: Nos resultados de análise da expressão, observamos que todos os receptores mutados e ttansfectados em células HEK 293 foram expressos, no entanto os receptores mutados nas posiçõesF806C,A824S,A835D e A843Tapresentaram diminuição na expressão quando comparados com o receptor nativo, sugerindo que a mutação de arninoácidoshidrofóbicos para hidrofílicosna porção transmembrana pode diminuir o grau de expressão do CASR Obtivemos alta produção da proteína recombinante correspondente ao domínio extracelular do CASR, entretanto não conseguimos quantidades suficientes de proteína solúveLdevido a fonnação de cOIposde inclusões.Isto sugere que o sistemade E. não é eficiente para produzir proteínas com estruturas mais complexas como o domínio extracelulardo receptor sensor de cálcio

ASSUNTO(S)

homeostase

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