Expressão da proteína capsidial do Grapevine leafroll-associated virus 3 em Escherichia coli e produção de anticorpos policlonais

AUTOR(ES)

Fajardo, Thor V.M., Barros, Danielle R., Nickel, Osmar, Kuhn, Gilmar B., Zerbini, F. Murilo

FONTE

Fitopatologia Brasileira

DATA DE PUBLICAÇÃO

2007-12

RESUMO

Grapevine leafroll-associated virus 3 (GLRaV-3), a principal espécie viral do complexo do enrolamento da folha da videira (Vitis spp.), causa reduções no rendimento e na qualidade da uva. O gene da proteína capsidial foi amplificado via RT-PCR a partir de RNA total, extraído de folhas de videira infectadas. O fragmento amplificado foi clonado e completamente seqüenciado. Em seguida, o fragmento foi subclonado no vetor de expressão pRSET-C. O plasmídeo recombinante foi utilizado para a expressão da proteína capsidial em Escherichia coli BL21:DE3. A proteína capsidial, ligada a uma cauda de 6-His, foi purificada por cromatografia de afinidade em coluna de Ni-NTA. A identidade da proteína purificada foi confirmada em SDS-PAGE e Western blot e, após quantificação, foi utilizada para imunizar coelhos. O anti-soro mostrou-se sensível e específico para a detecção do GLRaV-3 em extratos de videira por Western blot e DAS-ELISA, não tendo sido observadas reações inespecíficas ou heterólogas contra outros vírus sorologicamente não relacionados.

ASSUNTO(S)

videira glrav-3 proteína recombinante sorologia anticorpos

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