Estudo da interação da metaloprotease BmooMPα-I, isolada da peçonha de Bothrops moojeni (HOGE, 1965; Viperidae),com a citocina pró-inflamatória TNF-α.

AUTOR(ES)

Maraisa Cristina Silva

FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

29/06/2012

RESUMO

A inflamação é um processo essencial para manutenção da homeostase, envolvendo eventos vasculares, migração e ativação de leucócitos. No entanto, suas manifestações exacerbadas, geralmente mediadas pelo aumento do nível de citocinas pró-inflamatórias como o fator de necrose tumoral (TNF-α), podem resultar em doenças crônicas, como artrite reumatoíde, fibrose pulmonar e reações de hipersensibilidade. O presente estudo teve por objeto avaliar se a enzima BmooMPα-I, uma metaloprotease isolada da peçonha de Bothrops moojeni, apresenta algum papel na resposta inflamatória em modelos experimentais in vitro e in vivo. Foi realizado o isolamento da enzima BmooMPα-I, a partir da peçonha bruta da serpente Bothrops moojeni, utilizando colunas de cromatografia DEAE Sephacel, Sephadex G-75 e Benzamidina-Sepharose. A eletroforese bidimensional (2D) demonstrou grau de pureza, massa molecular (Mr) e ponto isoelétrico (pI) de um trímero proteíco em condições redutoras (~23,6 kDa; ~21,2 kDa e ~18,7 kDa; pI na faixa de 7,24 a 7,33) e em condições não redutoras somente um spot protéico pode ser evidenciado (~23,0 kDa; pI 6,82). Foi realizado a imunização de coelhos da raça nova Zelândia para obtenção de anticorpos policlonais da classe IgG anti-BmooMPα-I. O ensaio imunoenzimático indireto (iELISA) confirmou a presença dos anticorpos IgG policlonais anti-BmooMPα-I no soro dos animais imunizados. Suas especificidade e reatividade cruzada com os antígenos (enzima BmooMPα-I e peçonha bruta de B. moojeni) foram confirmadas por Immunoblot 1D. Os anticorpos policlonais anti-BmooMPα-I neutralizaram a atividade azoproteolítica induzida pela peçonha bruta de B. moojeni e enzima pura (BmooMPα-I) em 27% e 100%, respectivamente, na razão 1:15 (m/m). Camundongos BALB/c na presença da metaloprotease BmooMPα-I exibiram uma redução na migração de leucócitos para a cavidade peritoneal, sugerindo um perfil de resposta anti-inflamatória. Os níveis de TNF-α determinados pelo método de ELISA foram reduzidos significativamente na presença da enzima BmooMPα-I, sugerindo que a mesma exerce uma ação proteolítica sobre o TNF-α, que foi confirmada pelo desaparecimento desta citocina dentre o perfil de bandas proteícas no SDS-PAGE. O ensaio com macrófagos ativados com agonistas de PRRs, demostrou uma redução níveis de TNF-α secretado pelos macrófagos após o seu tratamento com a enzima BmooMPα-I. Em conclusão, a enzima BmooMPα-I apresenta um perfil antiinflamatório de reposta imunológica, resultante da sua ação direta sobre a citocina pró-inflamatória TNF-α.

ASSUNTO(S)

bothrops moojeni bmoompα -i tnf-α anticorpos policlonais macrófagos derivados de médula óssea (bmdms) imunologia aplicada polyclonal antibodies bone marrow-derived macrophages (bmdms)

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