Effect of growth hormone on fatty acid synthase gene expression in growing animals. / Efeito do hormônio do crescimento na expressão gênica da sintetase de ácidos graxos em animais em crescimento.

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2000

RESUMO

A somatotropina (ST) pode reduzir a deposição de gordura em suínos, em crescimento em até 90%. Este efeito parece ser função de diversas alterações no metabolismo do tecido adiposo, incluindo a redução na atividade da sintetase de ácidos graxos (FAS), considerada uma enzima limitante na via da síntese de lipídeos de novo. A atividade da FAS parece ser regulada principalmente através de alterações na abundância de seu mRNA, sendo fundamental conhecer os efeitos exercidos pela ST. Com este objetivo procurou-se validar o uso conjunto de duas técnicas: 1) o RT-PCR Quantitativo Competitivo (QC-RT-PCR), que permite monitorar a expressão gênica da FAS mesmo quando as concentrações de mRNA ou a quantidade de tecido são muito pequenas; e 2) uso de culturas de explantes de tecido adiposo, que permite submeter o tecido a um grande número de tratamentos. As culturas de longa duração possibilitam avaliar o efeito crônico da ST. Foram construídos "primers" para geração de um amplicon "nativo" de 307 bp e um "primer" anti-senso-deleção para amplificação de umfragmento de 243 bp denominado de "competidor". Em etapa subseqüente foram realizadas clonagens dos amplicons nativo e competidor que foram seqüenciados. Foi construída uma curva padrão, utilizando diluições seriais do DNA nativo e uma concentração constante do DNA competidor. Tecido adiposo de sete suínos, com peso médio de 78 kg, foram retirados assepticamente e os explantes incubados em meio 199 na presença de insulina, dexametasona e antibióticos, com e sem ST recombinante suína (pST; Reporcin, Southern Cross Biotech), por 48 horas. O RNA total dos explantes foi extraído e, a partir destes, sintetizados os DNAs complementares (cDNA) à população de mRNAs. Os cDNAs foram amplificados pela PCR com “primers” específicos para a FAS capazes de amplificar também o fragmento nativo. Os resultados da amplificação foram avaliados utilizando-se a curva padrão citada. Os resultados, consistentes com a literatura, demonstraram uma redução da atividade enzimática da FAS em tecidos incubados por 48 h com pST, (46,4 vs 35,8 nmoles/mg.min; P<0,05). Consistente com os dados de atividade e dados da literatura, utilizando-se outras técnicas, observou-se redução de 40% na abundância de mRNA da FAS, em culturas de tecido adiposo, tratadas com somatotropina (P<0,05). Os resultados demonstram que o uso conjunto das técnicas de cultura primária de explantes por longo período e do QC-RT-PCR pode ser uma ferramenta para o estudo dos mecanismos envolvidos na modulação do metabolismo pela somatotropina no tecido adiposo.

ASSUNTO(S)

hormônio animal somatropin aninaml hormone regulador de crescimento animal tecido adiposo expressão gênica adipose tissue suíno fatty acid gene expression ácido graxo somatotropina animal growth regulator swine

ACESSO AO ARTIGO

Documentos Relacionados