Efeito de meios de re-diluição pós-descongelação sobre a cinética e morfologia de espermatozóides caprinos congelados em meio à base de água de coco em pó (ACP-101) ou TRIS. / Effect of means of re-diluted post-thaw on the kinetics and morphology of frozen goat spermatozoa through the base of coconut milk powder (ACP-101) or TRIS.

Rodrigo Vasconcelos de Oliveira

O trabalho teve como objetivos: avaliar in vitro o sêmen caprino congelado nos meios diluentes à base de água de coco em pó (ACP-101) e TRIS (hidroxi-metil amino metano); analisar o efeito de soluções para re-diluição seminal pósdescongelação por meio de parâmetros cinéticos mensurados pelo sistema Sperm Class Analyser e; comparar a eficiência do corante azul de bromofenol (AB) com o corante clássico de eosina-nigrosina (EN) na avaliação morfológica do sêmen caprino fresco e descongelado submetidos ao teste de termo-resistência. Foram utilizados quatro bodes. Os diluentes empregados foram: ACP-101 (+ 2,5% gema ovo + 7% glicerol) e TRIS (+ 20% gema ovo + 6,8% glicerol). Os ejaculados foram coletados por vagina artificial, avaliados quanto a: volume, concentração, motilidade massal, porcentagem de espermatozóides móveis, motilidade individual progressiva, porcentagem de vivos e mortos e, alterações morfológicas. Em seguida, divididos em duas alíquotas, diluídas nos tratamentos experimentais ACP-101 e TRIS. As amostras foram refrigeradas até 4C, envasadas em palhetas, congeladas em vapores de nitrogênio, armazenadas em botijão criogênico (-196C) e descongeladas após 30 dias. As avaliações de motilidade espermática auxiliada por computador foram realizadas aos 5, 60 e 120 minutos pós-descongelação. Para rediluição pós-descongelação foram utilizados diluente base (DB: ACP-101 ou TRIS sem gema e sem glicerol), soluções de Ringer Lactato (RL) e de NaCl a 0,9% (SF). Três palhetas de cada tratamento por ejaculado avaliadas e re-diluídas, com uma das três soluções de re-diluição. Os parâmetros de motilidade espermática auxiliada por computador analisados foram: motilidades total (MT) (%) e progressiva (MP) (%), velocidades média do trajeto do espermatozóide (VAP) (μm/s) e linear (VSL) (μm/s), e população de espermatozóides rápidos (ER) (%). A morfologia espermática foi avaliada, aos 5 e 120 minutos pós-descongelação, por meio de esfregaços corados por EN e AB. Os parâmetros morfológicos avaliados foram: espermatozóides normais (N), alterações de cabeça (AC), de peça intermediária (API), e de flagelo (AF), gotas citoplasmáticas proximal (GCP), e distal (GCD), e cabeça destacada (CD). Os dados foram submetidos à ANOVA e aos teste de Duncan e Tukey (P <0,05). Independentemente da variável cinética, o tratamento ACP x RL apresentouse significativamente inferior durante o teste de termo-resistência. O diluente à base de TRIS apresentou resultados cinéticos significativamente superiores ao ACP-101, aos 60 e 120 minutos. Os espermatozóides diluídos e congelados no TRIS não sofreram influência das soluções de re-diluição pós-descongelação. Não existiu diferença significativa na observação de N entre tratamentos após 5 minutos do teste de termo-resistência. Após 120 minutos a quantificação de N foi influenciada significativamente pelo diluente, tendo o TRIS apresentado resultados superiores. O período de incubação de 120 minutos a 37oC promoveu o aumento das AC. Os parâmetros cinéticos, após 5 minutos de incubação a 37oC, dos espermatozóides diluídos e congelados em meio à base de ACP-101 demonstram sua potencialidade na criopreservação seminal de bodes. O meio diluente à base de TRIS promoveu uma maior proteção quanto às crioinjúrias em espermatozóides caprinos congelados. O corante azul de bromofenol demonstrou ser eficiente na avaliação do sêmen caprino fresco e pós-descongelação.

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