Distribuição de DNA repetitivo nos cromossomos de Copaifera langsdorffii Desf. (Caesalpiniodeae) : uma importante árvore produtora de óleos essenciais

Marcos Letaif Gaeta

Copaifera langsdoffii Desf. (Caesalpinioideae, Leguminosae) é uma árvore de grande porte, com ampla distribuição no Brasil. Esta espécie é encontrada em abundância desde a Amazônia até as formações de Cerrado e suas transições. Possui grande importância econômica devido à produção de óleo-resina, bem como em programas de restauração ambiental. Em relação às características citogenéticas, Copaifera langsdoffii possui cromossomos grandes, ao contrário da maioria das Caesalpinioideae que possuem cromossomos pequenos, sugerindo uma alta incidência de DNAs repetitivos no genoma. Para verificar o nível de diferenciação cariotípica em populações separadas geograficamente, foram utilizadas ferramentas cito-moleculares (coloração convencional, bandamento CMA/DAPI, isolamento e caracterização de DNAs repetitivos e hibridação in situ fluorescente) a partir de indivíduos de cinco populações dos Estados do Mato Grosso do Sul, Bahia, São Paulo e Paraná. Todas as populações mostraram 2n = 24, com predominância de cromossomos meta e submetacêntricos. Não foram encontradas variações cariotípicas contrastantes quanto ao número, tamanho e forma dos cromossomos. O núcleo foi sempre semi-reticulado com pequenas diferenças no tamanho e na porção de cromatina condensada entre as populações. O bandamento cromossômico mostrou um elevado número de blocos terminais e intercalares ricos em GC (CMA+/DAPI-), as quais apresentaram algumas diferenças na presença, ausência, tamanho e posição de bandas ricas em GC nos pares 3, 5, 8, 9 e 10, entre as cinco populações. A hibridação in situ com a sonda de DNAr 45S mostrou quatro sinais terminais, coincidentes com blocos CMA+ nos braços curtos dos pares 7 e 8 (São Jerônimo da Serra - PR, Assaí - PR e São José do Rio Preto - SP), e nos pares 3, 7 e 8, com indício de translocação envolvendo os pares 3 e 8 (Rio de Contas - BA e Três Lagoas - MS). Um segmento de DNA satélite foi isolado por corte de DNA genômico com a enzima de restrição RsaI, com o qual foi gerada um fragmento com cerca de 180 pb. Este foi isolado e utilizado como sonda na FISH, sendo localizado em blocos, principalmente nas regiões terminais e subterminais dos cromossomos, coincidindo com parte dos blocos ricos em GC. Isto sugere que parte das bandas CMA+ encontradas em C. langsdoffii podem pertencer a mais de uma família de DNA satélite. Para verificar a importância dos retroelementos no genoma de C. langsdoffii em relação aos outros segmentos repetitivos, foram realizadas reações de PCR com primers degenerados para elementos das famílias Ty1-copia e Ty3-gypsy, com posterior sequenciamento e FISH. Para o Ty1-copia, foi encontrada uma banda com cerca de 180 pb. Esta banda foi isolada e sequenciada, gerando um segmento de 185 pb, com sequência similar à da transcriptase reversa de Ipomoea batatas, o qual apareceu de modo disperso e homogêneo em todos os cromossomos após a FISH, independente da população. Para o Ty3-gypsy, foi encontrada uma banda de 410 pb no gel de agarose, que após um Semi-Nested-PCR e sequenciamento, revelou um segmento de 308 pb, similar às sequências da transcriptase reversa de Cycas revoluta. Na FISH, esta sonda apareceu também de modo disperso, com dots nas regiões terminais de alguns pares. Os dados obtidos neste trabalho sugerem que as populações estudadas mantêm mais similaridades cariotípicas do que diferenças. Do ponto de vista do DNA repetitivo, os cariótipos das populações de C. langsdorffii acumulam algumas diferenças decorrente do isolamento geográfico, se considerarmos a dinâmica dos mecanismos de diferenciação cariotípica envolvendo os segmentos de DNA repetitivos.

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