Discriminação molecular de linhagens de Aspergillus niger sensu strico produtoras e não produtoras de ocratoxina A

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2009

RESUMO

A ocratoxina A (OTA), uma micotoxina com propriedades nefrotóxica e genotóxica, tem recebido destaque devido à freqüente contaminação de produtos destinados à alimentação. A OTA é sintetizada por espécies pertencentes aos gêneros Penicillium e Aspergillus, entre elas, Aspergillus niger, uma das espécies fúngicas de maior importância econômica devido a sua utilização industrial na produção de enzimas e ácidos orgânicos. A via de biossíntese da OTA ainda não foi completamente esclarecida para nenhuma espécie fúngica. Entretanto, o modelo proposto sugere que a enzima policetídeo sintase (PKS) está envolvida na formação de um dos precursores dessa micotoxina. Recentemente, o genoma de A. niger CBS 513.88 foi completamente seqüenciado e 34 open reading frames (ORF) para PKSs distintas foram descritas. Com o objetivo de identificar entre essas ORFs, um gene que pudesse discriminar linhagens de A. niger produtoras e não produtoras de OTA, investigamos no genoma dessa espécie, seqüências similares a genes que expressam enzimas PKS relacionadas com a biossíntese de OTA. A partir do gene pks previamente caracterizado em A. ochraceus, foi identificado no genoma de A. niger, com cerca de 80% de identidade com o gene pks, a ORF An15g07920 que codifica para uma suposta enzima PKS. Um par de primers construído a partir do gene An15g07920 foi utilizado para amplificá-lo em linhagens de A. niger produtoras e não produtoras de OTA, através da técnica de PCR. O amplicon foi verificado apenas em linhagens produtoras da toxina, indicando que esse gene não está presente em linhagens não produtoras de OTA. A técnica de Southern blot, utilizando como sonda um fragmento de 556pb da seqüência An15g07920, repetiu os resultados obtidos na PCR. O sinal de hibridação da sonda foi observado apenas em isolados ocratoxigênicos e confirmou a ausência do gene em linhagens de A. niger incapazes de sintetizar a micotoxina. A análise comparativa in silico entre o genoma de duas linhagens de A. niger (CBS 513.88 e ATCC 1015) revelou que a ORF An15g07920 está ausente na linhagem ATCC 1015, confirmando que este gene é específico para algumas linhagens. Através da análise por RT-PCR em tempo real foi possível verificar uma correlação positiva entre os transcritos do gene An15g07920 e a quantidade de OTA produzida por A. niger.

ASSUNTO(S)

microbiologia molecular microbiologia - sínteses ocratoxinas aspergillus niger molecular microbiology microbiological synthesis ochratoxins

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