Diagnóstico molecular de paracoccidioidomicose pela técnica LAMP e avalação de nova formulação antifúngica complexo anfotericina B-7-dehidrocolesterol

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2009

RESUMO

Paracoccidioidomicose (PCM) é epidemiologicamente uma das mais importantes micoses da América latina, especialmente no Brasil. A doença ocorre por inalação do fungo Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis) e o foco primário ocorre no pulmão do hospedeiro. A PCM pode ser diagnosticada por observação direta da forma característica leveduriforme em amostra clínicas ou de cultura. De forma mais frequente, o diagnóstico é feito de forma indireta por exames sorológicos, principalmente por imunodifusão e teste imunoenzimático. O diagnóstico da PCM fora dos países endêmicos é difícil. Necessita-se desenvolver um diagnóstico mais rápido e específico para PCM. A amplificação circular isotérmica (LAMP) foi usada no presente estudo para detecção da presença de P. brasiliensis em amostras de escarro de pacientes com PCM crônica, suspeitos para PCM e controle negativo. O gene alvo gp43 de P. brasiliensis foi amplificado em menos de quatro horas em 11 amostras de escarro. O método LAMP possui a vantagem da velocidade e simplicidade quando comparado aos diagnósticos clássicos como o histopatológico ou cultura de material biológico e não requer aparato técnico sofisticado. Pode constituir-se em um importante auxílio nos casos onde o estabelecimento do tratamento rápido pode significar a sobrevida do paciente, especialmente naqueles imunossuprimidos. Apesar dos avanços significativos em muitas áreas da micologia médica, a PCM permanece com um tratamento de consenso ainda não estabelecido e assim representa a oitava causa comum de morte em doenças predominantemente crônicas ou reemergentes, entre as infecciosas e parasitárias e a mais elevada taxa de mortalidade entre as micoses sistêmicas. A anfotericina B (AMB) permanece como a principal escolha terapêutica para micoses severas. No entanto, sua utilização é limitada pela toxicidade. Para melhorar a eficácia terapêutica e reduzir a toxicidade da AMB em altas doses, muitas estratégias incluindo a utilização de mudança no sistema de veiculação da droga têm sido utilizadas. O complexo anfotericina B-7-dehidrocolesterol (AMB-7DC) é uma nova estratégia para AMB para redução de sua toxicidade, utilizando como solvente HCO-60, tornando-se mais hidrossolúvel e resistente às variações térmicas. Este trabalho apresenta dados preliminares da avaliação de AMB-7DC em relação a anfotericina B comercial (AMB-D, Fungizona). Parâmetros in vitro de concentração inibitória mínima (MIC) e teste de hemólise em eritrócito de carneiro foram utilizados. Testes in vivo avaliaram a LD50 das drogas, o CFU de pulmão em PCM murina, e a taxa de sobrevivência em modelo agudo de criptococose. Os resultados indicaram uma baixa toxicidade in vitro para AMB-7DC que não foi hemolítica nas concentrações testadas enquanto a AMB-D mostrou atividade hemolítica. O MIC demonstrou sensibilidade para ambas as drogas ao Cryptococcus neoformans. Os resultados in vivo em relação ao CFU mostraram resultados semelhantes na PCM para ambas as drogas, não havendo erradicação do fungo. Já os dados da criptococose foram favoráveis ao grupo tratado com AMB-D, havendo dose dependência para ambas. O presente estudo indica que AMB-7DC possui potencial de utilização e, sendo assim, mais estudos são indicados para sua melhor avaliação.

ASSUNTO(S)

microbiologia paracoccidioidomicose paracoccidioides brasiliensis microbiology paracoccidioidomycosis

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