Detecção de Mycobacterium leprae através da técnica de PCR e RT-PCR em tempo real / Detection of Mycobacterium leprae by PCR and real-time RT-PCR

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2009

RESUMO

A caracterização do genoma do Mycobaterium leprae tornou possível o desenvolvimento de sistemas de amplificação por PCR de regiões gênicas distintas, de hibridação por sonda, bem como, testes imunológicos e sorológicos. Esses testes laboratoriais foram amplamente avaliados e proporcionaram evidências sobre a rota de transmissão, susceptibilidade genética e detecção de resistência a drogas em hanseníase. Ainda, o aumento da confiabilidade e eficiência da técnica da PCR quantitativa (qPCR) a torna uma ferramenta promissora para o diagnóstico. Nesse sentido, o primeiro estudo comparou a PCR convencional e TaqMan em tempo real tendo sequências do complexo do antígeno 85 como alvos. Resultados demonstraram que o ensaio Ag 85B TaqMan apresentou maior sensibilidade (100% para pacientes MB e 79,2% para PB). Além disso, o ensaio 85B TaqMan foi capaz de diferenciar pacientes multibacilares (MB) dos paucibacilares (PB) (P<0,0001). Entretanto, a simples detecção do DNA de M. leprae não é suficiente para estabelecer uma relação de causa para o desenvolvimento da doença. Até então, nenhum dos métodos imunológicos (anti-PGL-1 ou produção de IFN ) combinados ou isolados com a PCR foi capaz de distinguir exposição, infecção ou doença. Assim, na segunda etapa do estudo foram caracterizados e comparados dois ensaios para a detecção da carga bacilar e determinação da viabilidade. Resultados mostraram que ambos os ensaios (sodA/RLEP e 16S rRNA/RLEP) foram bons preditores de viabilidade de M. leprae durante o tratamento de curta duração (48h) com rifampicina em meio axênico, macrófagos (M ) murínico tratados com rifampicina ou M imuno-ativados. Além disso, o ensaio 16S rRNA/RLEP, mas não o sodA/RLEP, identificou de forma consistente a presença de M. leprae em amostras de oito pacientes MB antes do tratamento com a poliquimioterapia (PQT) e demonstrou o declínio da viabilidade durante o curso da PQT. A última etapa do estudo avaliou a especificidade e sensibilidade de quatro diferentes ensaios de qPCR (sodA, 16S, RLEP e Ag 85B) utilizando um classificador probabilístico Naïve Bayes para o diagnóstico de hanseníase. Uma variedade de amostras clínicas, que poderiam enviesar os resultados, foi utilizada sendo a sensibilidade e especificidade para cada um dos quatro ensaios semelhantes, apesar do ensaio Ag 85B ter se mostrado pouco mais sensível. De modo geral, a PCR pode ser considerada uma ferramenta confiável para o monitoramento da hanseníase, apesar de o resultado não invalidar o diagnóstico tradicional pelo exame clínico e microscópico. Ainda, os resultados do ensaio de viabilidade são animadores já que, futuramente, poderão ser utilizados para o diagnóstico precoce e definir de forma precisa a quantidade de bacilos presentes na amostra para uma melhor avaliação do efeito do tratamento.

ASSUNTO(S)

genoma bacteriano mycobacterium leprae mycobacterium leprae genome, bacterial genetica molecular e de microorganismos reverse transcriptase polymerase chain reaction polymerase chain reaction reação em cadeia da polimerase reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa

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