Desenvolvimento de metodos enzimaticos em fluxo para a determinação quantitativa de acetilcolina e de peraoxon

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DATA DE PUBLICAÇÃO

1998

RESUMO

Neste trabalho, foi desenvolvido um sistema de injeção em fluxo para determinação quantitativa de acetilcolina. O método é baseado na geração de ácido acético pela reação da enzima (acetilcolinesterase) com o substrato (acetilcolina). Esta enzima foi quimicamente imobilizada em "glass beads". O ácido acético formado pela reação da colinesterase com acetilcolina permeia através de uma membrana de poli-tetrafluoretileno (PTFE) para um fluxo de água deionizada, e é detectado em uma célula condutimétrica. A relação entre a altura de pico e concentração de ácido acético formado é proporcional à concentração de acetilcolina presente na amostra, na faixa de concentração proposta. Foi encontrada uma faixa linear de 1,0x10 mol.L a 1,0x10 mol.L de acetilcolina versus altura de pico. Neste trabalho também foi desenvolvido um sistema FIA condutimétrico para detecção quantitativa do dietil p-nitrofenil fosfato (paraoxon), pesticida amplamente utilizado na agricultura. Com a introdução de uma concentração conhecida de paraoxon no sistema FIA, foi observado um decréscimo da altura do pico, como função direta de um decréscimo da quantidade de ácido acético formado, devido à inibição da colinesterase. A correlação entre a diferença de pico versus concentração de paraoxon, é linear na faixa de 1,0x10 mol.L a 5,0x10 mol.L, portanto, o limite quantitativo de detecção foi cerca de 1,0x10 mol.L de paraoxon. Para propostas semi-quantitativas, o limite de detecção pode ser considerado cerca de 5,0x10 mol.L para o paraoxon. O desvio padrão relativo obtido foi de 2,2%(n=8), para uma solução de acetilcolina 1,0x10 mol.L e uma solução de 5,0x10 mol.L de paraoxon. Para a reativação da enzima imobilizada, foram utilizadas soluções de 1,1 -trimetileno-bis(brometo de 4-formilpiridina) dioxima (TMB-4). O sistema "stopped-flow" foi estudado de forma a obter uma maior capacidade de inibição da colinesterase. A correlação entre a diferença de altura de pico versus concentração de paraoxon é linear na faixa de 1,0x10 mol.L a 5,0x10 mol.L. O sistema apresentou um limite de detecção de 5,0x10 mol.L para o pesticida. O desvio padrão relativo foi de 1,2% (n=6), para uma solução de acetilcolina 1,0x10 mol.L e uma solução de 4,0x10 mol.L de paraoxon. Também foi desenvolvido um método de determinação quantitativa para acetilcolina e para o paraoxon com detecção espectrofotométrica. Nesta caso, o ácido acético formado permeia através da membrana PTFE e é recebido por um fluxo de uma solução de púrpura de bromocresol (PBC) e é detectado espectrofotometricamente. Foi encontrado uma linearidade entre concentração de acetilcolina e altura de pico na faixa de 1,0x10 a 5,0x10 mol.L. O procedimento proposto apresentou um limite de detecção de 1,0x10 mol.L para o paraoxon, a correlação entre altura de pico e concentração de paraoxon foi de 5,0x10 mol.L a 5,0x10 mol.L, com um desvio padrão relativo de 1,7% (n=10) para uma solução de acetilcolina 5,0x10 mol.L e uma solução de 5,0x10 mol.L de paraoxon.

ASSUNTO(S)

inibidores da colinesterase espectrofotometria pesticidas

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