Damage assessment of the equine sperm membranes by fluorimetric technique

AUTOR(ES)

Celeghini, Eneiva Carla Carvalho, Andrade, André Furugen Cesar de, Raphael, Cláudia Fernandes, Nascimento, Juliana, Ticianelli, Janahi Souza, Arruda, Rubens Paes de

FONTE

Brazilian Archives of Biology and Technology

DATA DE PUBLICAÇÃO

2010-12

RESUMO

Para validar uma técnica prática de avaliação simultânea das membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial em espermatozóides eqüinos três sondas fluorescentes (PI, FITC-PSA e MITO) foram associadas. Quatro ejaculados de três garanhões (n=12) foram diluídos em meio TALP e divididos em duas alíquotas, uma alíquota foi submetida a flash frozen em nitrogênio líquido para induzir danos nas membranas celulares. Três tratamentos foram preparados com as seguintes proporções de sêmen fresco: sêmen flash frozen: 100:0 (T100), 50:50 (T50), e 0:100 (T0). Uma amostra de 150 µL de sêmen diluído de cada tratamento foi adicionada de 2 µL de PI, 2 µL de MITO e 80 µL de FITC-PSA; incubadas à 38,5ºC/8 min, e as células espermáticas foram avaliadas por microscopia de epifluorescência. Baseados na análise de regressão esta é uma técnica eficiente e prática para determinar danos em espermatozóides eqüinos, capaz de determinar a porcentagem de espermatozóides mais representativa do potencial fertilizante do ovócito.

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