Cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos utilizando angiotensina II (ANG II), fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) e peptídeo intestinal vasoativo (VIP). / In vitro culture of goat preantral follicles using angiotensin II (Ang II), endothelial growth factor (VEGF) and vasoactive intestinal peptide (VIP).

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

14/12/2010

RESUMO

Os objetivos do presente estudo foram avaliar o efeito de diferentes concentrações da angiotensina II (ANG II), fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) e peptídeo intestinal vasoativo (VIP) no desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos e verificar a localização do receptor 2 do VEGF (VEGFR-2) e a expressão dos receptores da ANG II (AGTR1 e AGTR2) em ovários caprinos. Para investigar a localização do VEGFR-2 e expressão do AGTR1 e AGTR2 no ovário caprino, foram empregadas as técnicas de imunohistoquímica e PCR em tempo real, respectivamente. Para avaliar a eficiência das substâncias supracitadas sobre a sobrevivência e o crescimento folicular, fragmentos de córtex ovariano foram cultivados in vitro por um ou sete dias em meio essencial mínimo suplementado (MEM+) adicionado de diferentes concentrações das referidas substâncias. Antes e após o período de cultivo, os fragmentos de córtex ovariano foram fixados e processados para histologia clássica. Os folículos foram classificados quanto ao grau de desenvolvimento em primordiais ou em desenvolvimento, e quanto à sobrevivência em normais ou degenerados. O diâmetro folicular foi avaliado antes e após o cultivo. As técnicas de microscopia de fluorescência e microscopia eletrônica de transmissão (MET) foram utilizadas para melhor avaliar a viabilidade e morfologia desses folículos, respectivamente. Após definição das melhores concentrações de VIP, foi realizado um último experimento a fim de quantificar a expressão dos RNAm para o VIP em ovários caprinos através da técnica de PCR em tempo real, e avaliar a influência do VIP isoladamente ou em associação ao FSH sobre a sobrevivência e o desenvolvimento de folículos secundários caprinos isolados, bem como sobre a expressão do RNAm para o VIP e receptor de FSH (FSH-R) nesses folículos cultivados por seis dias. Os resultados do cultivo in vitro mostraram que após sete dias, 10 ng/mL de ANG II promoveu a manutenção da viabilidade e ultraestrutura de folículos pré-antrais caprinos. Os RNAm para AGTR1 e AGTR2 foram detectados em todas categorias e tipos foliculares estudados. No que se refere ao VEGF, as concentrações de 10 e 200 ng/mL foram mais eficientes para promover o crescimento e manter a viabilidade, respectivamente. Além disso, o receptor VEGFR-2 foi encontrado em oócitos de folículos em todos os estágios de desenvolvimento e em células da granulosa de folículos em crescimento. O VIP foi mais efetivo em promover o crescimento e manutenção da ultraestrutura folicular após sete dias de cultivo quando utilizado na concentração de 10 ng/mL. A presença de RNAm para o VIP foi demonstrada em todas categorias foliculares em ovários de cabras, mostrando um aumento em seus níveis durante a transição de folículo primordial para secundário. No entanto, a utilização de VIP e/ou FSH não afetou o desenvolvimento de folículos secundários e não alterou os níveis de RNAm para FSH-R embora tenha reduzido os níveis de RNAm para o VIP após cultivo in vitro de folículos pré-antrais por seis dias. Diante disso, concluiu-se que ANG, VEGF e VIP apresentam importantes funções no desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos.

ASSUNTO(S)

ang ii vip vegf pré-antral cultivo in vitro reproducao animal ang ii vip vegf preantral in vitro culture

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