Construção de uma biblioteca de anticorpos (scFv) apresentada em fagos para seleção, análise e caracterização de antígenos do carrapato bovino (Boophilus microplus)

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

CAPÍTULO I: A amplificação de fragmentos scFv (fragmentos variáveis de cadeia única) de animais imunizados é um importante método na geração de anticorpos monoclonais. Neste trabalho galinhas foram imunizadas com proteínas totais das fases larval e adulta (teleóginas) do carrapato bovino Boophilus microplus para a geração de uma biblioteca combinatorial de anticorpos anticarrapato. RNA total de baço destes animais foram extraídos e reações de amplificação (PCR) foram feitas utilizando iniciadores específicos das regiões variáveis dos anticorpos com a finalidade de obter toda a variabilidade do repertório imune na construção da biblioteca. Cinco ciclos de seleção (biopanning) foram feitos para captura dos clones scFv reativos às proteínas totais de larvas e teleóginas. A afinidade dos clones às proteínas totais do carrapato bovino foi confirmada por imunoensaio (ELISA) demonstrando um aumento da afinidade dos clones ao ligante ao longo dos cinco ciclos de seleção. O sequenciamento dos clones do quinto ciclo demonstrou uma predominância de clones idênticos tanto para a biblioteca construída utilizando proteínas de larvas, quanto para proteínas de teleóginas. Os anticorpos recombinantes scFv foram utilizados para seleção e caracterização de epítopos miméticos à proteínas do carrapato bovino para utilização como imunógenos no controle deste parasita. CAPÍTULO II: Uma biblioteca de anticorpos scFv recombinantes apresentada em fagos filamentosos foi utilizada para análise e caracterização de alvos protéicos contra o carrapato bovino. Uma proteína com alta similaridade a proteína GP80, similar a vitelina, uma abundante proteína encontrada nos ovos de parasitas adultos e larvas, foi reconhecida pelos anticorpos (Fragmentos scFv) nos testes de western blot e sua seqüência foi determinada por sequenciamento N-terminal. Os mesmos clones foram utilizados para seleção de epitopos, em uma biblioteca de peptídeos constrita de sete resíduos flanqueados por duas cisteínas (C7C) expressos em fagos, para obtenção de peptídeos miméticos às proteínas de carrapato. O resultado obtido foi confirmado com a identificação, pelo Fragmento scFv, de motivos protéicos (GP80 e outras proteínas definidas como promissores imunógenos como receptores de serotonina, antígeno B de membrana e outras), expressos na biblioteca de peptídeos recombinantes C7C. A vitelina e outras proteínas já descritas por alguns autores como sendo promissores antígenos vacinais, aqui neste experimento aparecem melhor caracterizada, com regiões imunogênicas reconhecidas por afinidade ao anticorpo recombinante gerado por phage display. Os resultados demonstram a eficiência da utilização de bibliotecas scFv na seleção de novos alvos protéicos contra o carrapato bovino.

ASSUNTO(S)

boophilus microplus genetica fragmento scfv biblioteca de anticorpos antibodies antibodies library anticorpo biblioteca de peptídeos scfv fragments peptide library genética molecular phage display

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