Comparação de três protocolos distintos para extração de RNA de amostras fixadas em formalina e emblocadas em parafina

AUTOR(ES)

Gouveia, Gisele Rodrigues, Ferreira, Suzete Cleusa, Sabino, Ester Cerdeira, Siqueira, Sheila Aparecida Coelho, Pereira, Juliana

FONTE

Jornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial

DATA DE PUBLICAÇÃO

2011-12

RESUMO

INTRODUÇÃO: Tecidos fixados em formalina e emblocados em parafina (FFEP) são importantes fontes de amostras para estudos retrospectivos. Apesar de sua capacidade de preservação de proteínas e morfologia celular, a formalina interfere negativamente em testes de biologia molecular por fragmentar e modificar quimicamente os ácidos nucleicos, particularmente o ácido ribonucleico (RNA). OBJETIVO: Comparar a eficiência de três diferentes protocolos de extração de RNA para análise de expressão gênica de tecidos FFEP. MATERIAL E MÉTODOS: Amostras de linfonodo humano FEEP foram submetidas à extração de RNA utilizando-se os kits Ambion e Arcturus Bioscience e o método clássico de Trizol. Após a extração, o RNA foi quantificado e testado quanto à sua capacidade de amplificação pela reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR) utilizando primers do gene endógeno gliceraldeído-3 fosfato desidrogenase (GAPDH). DISCUSSÃO/CONCLUSÃO: Todos os protocolos testados produziram quantidades adequadas e suficientes de RNA total, entretanto, somente os protocolos com uso dos kits Ambion e Arcturus produziram RNA capaz de ser amplificado pela PCR.

ASSUNTO(S)

tecidos formalina parafina rna expressão gênica

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