Comparação da extração de DNA utilizando proteinase K e kit de extração: análise da qualidade do material genético
AUTOR(ES)
Santos, André Luís F., Oliveira, Carolina Q. P., Arruda, Geovana Nicole P. N., Martins, John Kenned
FONTE
J. Bras. Patol. Med. Lab.
DATA DE PUBLICAÇÃO
2018-04
RESUMO
RESUMO INTRODUÇÃO: O ácido desoxirribonucleico (DNA) é a matéria-prima para os estudos genéticos, por isso são desenvolvidas técnicas laboratoriais para sua obtenção, com concentração e integridades adequadas. OBJETIVO: Comparar dois métodos de extração de DNA em relação à concentração e à integridade da amostra. MÉTODOS: O DNA foi extraído da extremidade das caudas (2 mm de comprimento) de camundongos, as quais foram estocadas a -20ºC. Utilizou-se a metodologia de extração com proteinase K (MPK) e o kit Kappa Express Extract®. As concentrações e as relações 260/280 e 260/230 foram determinadas por espectrofotometria. A integridade do DNA foi verificada em gel de agarose a 2%, com brometo de etídeo. Para o teste final das amostras extraídas, realizou-se reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex, com primers para o gene Large. RESULTADOS: As amostras extraídas pela MPK apresentaram concentração média de 59,4 ± 18,5 ng/µl (260/280 = 1,74 ± 0,04 e 260/230 + 1,85 ± 0,14) e as extraídas pelo kit comercial, concentração média de 178,8 ± 42 ng/µl (260/280 = 1,09 ± 0,04 e 260/230 = 0,62 ± 0,66). A PCR amplificou o gene Large no DNA extraído, independente da metodologia utilizada. CONCLUSÃO: As metodologias estudadas podem ser utilizadas, sendo a MPK uma metodologia barata, porém demorada, enquanto o kit comercial é mais oneroso, contudo a extração do DNA é célere.
ASSUNTO(S)
dna camundongos técnicas de genotipagem
Documentos Relacionados
- Protocolo da extração de DNA de material parafinado para análise de microssatélites em leiomioma
- Otimização da extração de DNA do solo utilizando um homogeneizador manual
- Análise de testes de personalidade: qualidade do material, das instruções, da documentação e dos itens qualidade de testes de personalidade
- Comparação de métodos de extração da solução do solo
- Comparação entre protocolos de extração de DNA para algodão.