Cloning and expression of meta-cleavage enzyme (CarB) of carbazole degradation pathway from Pseudomonas stutzeri
AUTOR(ES)
Larentis, Ariane Leites, Alves, Tito Lívio Moitinho, Martins, Orlando Bonifácio
FONTE
Brazilian Archives of Biology and Technology
DATA DE PUBLICAÇÃO
2005-06
RESUMO
Carbazol e seus derivados são compostos nitrogenados aromáticos, presentes comumente em petróleo e potencialmente poluentes. A rota de biodegradação de carbazol a ácido antranílico em Pseudomonas sp. é composta por três enzimas responsáveis, respectivamente, pelas reações de dioxigenação angular, meta-clivagem e hidrólise. A segunda enzima da rota, 2'-aminobifenil-2,3-diol 1,2-dioxigenase (CarB), codificada por dois genes (carBa e carBb), é um heterotetrâmero com atividade catalítica na quebra do anel catecol do susbtrato na posição meta. Neste trabalho, foi clonado o produto de PCR de 1082pb correspondente aos genes carBaBb da bactéria degradadora de carbazol Pseudomonas stutzeri ATCC 31258. A estratégia de clonagem empregada foi a de recombinação sítio-específica e a construção dos plasmídeos foi confirmada por PCR, digestão com enzima de restrição e seqüenciamento. A enzima ativa foi expressa em altas concentrações em vetor pDEST TM17 com cauda de histidina e promotor T7 em Escherichia coli BL21-SI com indução por NaCl durante 4h.
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