Clonagem, expressão e purificação da proteína ligadora de alcano sulfonatos do sistema de transporte ABC de Xanthomonas axonopodis pv.citri. / Cloning, expression and purification of the Xanthomonas axonopodis pv citri ABC transport alkanosulphonate-binding protein.

AUTOR(ES)

Fabiano Tófoli de Araújo

DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

O genoma de Xanthomonas citri (Xac) possui mais de 20 tipos de transportadores do tipo ABC incluindo o operon ssuABC associado ao transporte de alcano sulfonatos. Deste operon, escolhemos a proteína periplasmática ligadora de alcano sulfonatos SsuA2, para caracterização e análises espectroscópicas e estruturais. A rSsuA2 foi expressa no citoplasma de células de Escherichia coli e utilizada para a preparação de anticorpos em camundongos, que foram capazes de reconhecer a proteína recombinante, mas não a nativa no extrato de células de Xac. A rSssuA2 apresenta estrutura característica de proteínas alfa-beta, maior estabilidade em pH neutro (7.0), como também foi evidenciado pela obtenção de cristais somente nesta faixa, e pouca flexibilidade ao desenovelamento térmico. Os cristais difratam com resolução de 1.8 Å e pertencem ao grupo espacial de simetria P21. Além do o operon ssu (ssu2) altamente conservado, Xac apresenta o operon tau (ssu1) para captação de taurina. O papel do operon para Xac é discutido.

ASSUNTO(S)

dichroism circular xanthomonas cristalografia proteínas de transporte fluorimetria fluorimetry xanthomonas crystallography afinity cromatography transport proteins dicroísmo circular cromatografia afinidade

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