Clonagem e expressão da glicoproteina E (gE) do vírus da doença de Aujeszky em sistema de baculovirus

AUTOR(ES)

Dambros, Régia Maria Feltrin, Ribeiro, Bergman Moraes, Aguiar, Raimundo Wagner de S., Schaefer, Rejane, Esteves, Paulo Augusto, Perecmanis, Simone, Simon, Neide Lisiane, Silva, Nayara Cavalcante, Coldebella, Michele, Ciacci-Zanella, Janice Reis

FONTE

Brazilian Journal of Microbiology

DATA DE PUBLICAÇÃO

2007-09

RESUMO

A doença de Aujeszky (DA) é uma enfermidade infecto-contagiosa que causa grandes perdas econômicas ao produtor e à agroindústria suinícola em todo o mundo. É causada pelo vírus da doença de Aujeszky (VDA), um alfaherpesvírus envelopado com genoma DNA de fita dupla e linear. O genoma do VDA codifica 11 glicoproteínas, as quais são os maiores alvos do sistema imune do hospedeiro em resposta a infecção. A glicoproteína E (gE) é uma proteína não essencial e a deleção do gene da gE é muito utilizada para a produção de vacinas com marcadores. Com o objetivo de desenvolver insumos moleculares para a produção de um teste de ELISA específico para gE do VDA, a seqüência do gene da gE foi amplificada, clonada e expressa no sistema de expressão em baculovírus. O produto da amplificação foi clonado no vetor pGem®-T Easy e subclonado no plasmídeo de expressão pFastBac™1. O DNA recombinante pFastBac-gE-VDA foi usado para a transposição sítio-específica no baculovírus recombinante (bacmid). Após seleção por antibióticos e cor, as colônias com o recombinante bacmid-pFastBac-gE-VDA foram selecionadas e a presença do gene da gE foi confirmada por PCR. O DNA recombinante viral, bacmid-pFastBac-gE-VDA, foi usado para cotransfecção de células de inseto Trichoplusia ni e a presença do recombinante e a proteína gE foi determinada por PCR, por SDS-PAGE e Western blotting, respectivamente.

ASSUNTO(S)

aujeszky glicoproteína e baculovírus recombinante

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