Clonagem e caracterização dos genes que codificam endo-xilogalacturonana hidrolase, o fator de transcrição PacC e a proteína PalA em Crinipellis perniciosa, agente causal da vassoura-de-bruxa em Theobroma cacao / Cloning and characterization of the genes encoding endoxylogalacturonan hydrolase, PacC transcription factor, and PalA protein in Crinipellis perniciosa, witches broom causal agent in Theobroma cacao

AUTOR(ES)

Gilvan Ferreira da Silva

DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

Crinipellis perniciosa é o agente causal da vassoura-de-bruxa no cacaueiro, e em outras espécies do gênero Theobroma, causando danos na cultura do cacau e cupuaçu com grande impacto econômico. Neste trabalho, descrevem-se o isolamento e a caracterização dos genes que codificam endoxilogalacturonana hidrolase (Xgh), PalA e PacC. O gene xghCp possui uma região codificadora de 1.251 pares de bases, interrompida por quatro possíveis íntrons. A proteína deduzida apresenta 417 aminoácidos, sendo codificada por um gene cópia única. A transcrição do gene foi analisada por meio da técnica de RT-PCR, sendo avaliados os efeitos do pH e das fontes de carbono glicose e pectina. A transcrição do gene não foi reprimida por glicose 1%. Em presença de pectina os transcritos do gene xghCp foram detectados em pHs variando de 4,0 a 8,0. Na análise filogenética da proteína deduzida, XghCp agrupou-se com endo-xilogalacturonana hidrolase de Aspergillus tubingensis, Aspergillus niger e duas enzimas similares a Xgh de Aspergillus fumigatus. O alinhamento múltiplo revelou que XghCp apresenta, na região correspondente ao sítio de ligação ao substrato de poligalacturonase, a seqüência GIK (Gy-Ile-Lys) que foi comum a todas as endo-xilogalacturonanas hidrolase analisadas. Este é o primeiro relato de endo-xilogalacturonana hidrolase em basidiomiceto. Neste trabalho também foi realizada a clonagem e caracterização dos genes palA e pacC, relacionados à transdução de sinal em resposta ao pH em C. perniciosa. A transcrição do gene palACp não é regulada por pH e a proteína deduzida apresentou o domínio conservado BRO1. A análise filogenética mostrou que esta proteína é conservada de fungos a humanos. Foram seqüenciados 4.347 pb correspondentes ao gene pacCCp, que apresentou uma ORF de 2.472 pb interrompida por 8 íntrons putativos. Na região promotora, foram localizados três possíveis sítios de reconhecimento para PacCCp (5GCCAG3), o que sugere um sistema de auto-indução deste gene em pH alcalino. Os transcritos do gene pacCCp foram detectados por RT-PCR em pH 6,8 e 8,0 em 8, 18 e 32 horas após a indução. Em pH 4,0, foi observada a transcrição basal no período de 8 a 32 horas. A seqüência deduzida apresentou 824 aminoácidos, com domínios dedos de zinco extremamente conservados em leveduras e fungos filamentosos. Motivos de reconhecimento proteína-proteína YPXL/I de interação com PalA foram localizados na região C-terminal da proteína PacCCp entre os aminoácidos 637 e 742. A identificação dos genes pacC e palA sugere que C. perniciosa, apresenta a cascata de sinalização em resposta ao pH.

ASSUNTO(S)

genetica molecular e de microorganismos pacc theobroma cacao theobroma cacao vassoura-de-bruxa pacc crinipellis perniciosa crinipellis perniciosa

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