Caracterização morfofuncional das células somáticas de folículo ovariano bovino, cultivado em meio de cultura definido, não indutor de luteinização

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

Os efeitos dos hormônios gonadotrópicos sobre o desenvolvimento folicular já são bem caracterizados, no entanto, interações entre gonadotrofinas, esteróides e fatores de crescimento sobre os mecanismos intraovarianos envolvidos na regulação da foliculogênese e esteroidogênese ainda são pouco compreendidos. Neste sentido, o presente trabalho padroniza sistemas de cultivo com as células somáticas da parede do folículo, representado pela hemissecção da parede folicular, utilizando dois meios distintos: Um meio definido, aqui denominado α-MEM e um meio indefinido, aqui denominado TCM. Os sistemas de cultura foram avaliados com relação à manutenção da atividade esteroidogênica, por dosagem dos hormônios estradiol e progesterona, expressão do RNAm da proteína StAR, enzimas da esteroidogênese, e receptor de FSH, aspectos morfológicos e imunomarcação para Cx43 nas hemissecções antes e após cultivo por 24 e 48 horas. Foram utilizados ovários de vacas abatidas em frigoríficos e transportados até o laboratório em solução salina à 37 C, dos quais foram dissecados folículos aparentemente saudáveis com 4 e 5 mm diâmetro. Os folículos foram seccionados ao meio para obter as hemissecções da parede do folículo, ou em três para obtenção das partes utilizadas na análise de RTPCR. As secções do folículo foram cultivadas em meio 100ul do meio e incubadas em estufa a 37,5C com 5% CO2 e 95% umidade por 24 ou 48 horas. Os Resultados mostram que os meios possuem capacidades de regulação distintas sobre a esteroidogênese folicular, características morfológicas e imunomarcação para Cx43. Os Sistemas de cultura com meio TCM apresentaram elevada concentração de P4 com 24 horas, e aumento progressivo da secreção deste hormônio no cultivo com 48 horas, redução da luminosidade das bandas das enzimas da esteroidogênese ( P450scc, arom, 17bHSD, 3bHSD) e do receptor do FSH após cultivo de 48 horas, além de alteração da morfologia celular a qual adquire forma semelhante a fibroblastos e perda da comunicação célula-célula evidenciada pela ausência da imunomarcação para Cx43 nas células foliculares; resultados que indicam luteinização celular, que podem ser decorrentes do uso do soro fetal bovino e elevadas concentração de FSH utilizado neste meio. Já os resultados obtidos para os sistemas de cultura que utilizaram o meio definido a-MEM puro ou acrescido de FSH em concentração fisiológica, mostra habilidade deste meio em manter atividade esteroidogênica ao longo do tempo de cultura, com menor secreção de P4 do que a obtida no meio indefinido, que não se altera ao longo da cultura, manutenção da expressão das enzimas da esteroidogênese após 48 horas de cultivo, além de conservar a característica morfológica das células semelhantes às obtidas in vivo e elevada expressão da proteína Cx43, resultados semelhantes àqueles obtidos com outros sistemas de cultivo livre de soro, e deixa evidente a capacidade do meio em manter as células foliculares in vitro com comportamento semelhante àquele de células de folículos saudáveis e em desenvolvimento. No meio a-MEM acrescido com FSH foi evidente o efeito estimulante sobre atividade esteroidogênica das células somáticas quando utilizado em dose fisiológica, por estimular a P450 aromatase e prevenir morte celular.

ASSUNTO(S)

meio definido medicina hemissecção folicular

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