CaracterizaÃÃo molecular de Bacillus thuringiensis utilizando REP-PCR e perfil plasmidial / Molecular characterization of Bacillus thuringiensis using REP-PCR and plasmid pattern.

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2009

RESUMO

RESUMO SILVA, R.B. da. CaracterizaÃÃo molecular de Bacillus thuringiensis utilizando REP-PCR e perfil plasmÃdial. 2009. 82 p. DissertaÃÃo (Mestrado em Agronomia/Biotecnologia Vegetal) â Universidade Federal de Lavras, Lavras. Os insetos constituem uma das principais causas de danos à produÃÃo agrÃcola no mundo. O controle de insetos tem sido realizado essencialmente por meio de agroquÃmicos. A bactÃria entomopatogÃnica Bacillus thuringiensis tem sido utilizada como alternativa de controle. à uma bactÃria Gram-positiva que ocorre naturalmente no solo e produz proteÃnas na forma de cristais que sÃo tÃxicas a uma variedade de insetos entre as ordens Lepidoptera, Diptera, e ColeÃptera. Apresenta alta variabilidade genÃtica e està amplamente distribuÃda na natureza. O presente trabalho objetivou a caracterizaÃÃo de cepas pertencentes ao banco de B. thuringiensis da EMBRAPA-CNPMS, quanto ao perfil plasmÃdial e avaliar a diversidade genÃtica com base nas sequÃncias repetitivas ERIC e REP. O perfil plasmidial foi avaliado pela migraÃÃo das bandas em gel de agorose sendo possÃvel visualizar o perfil de 49 das 60 cepas utilizadas. Cepas pertencentes a uma mesma subespÃcie apresentaram diferentes migraÃÃes de plasmÃdeos, com exceÃÃo das cepas 348L e 462A pertencentes à subespÃcie galleriare. A cepa T09 Bt tolworthi apresentou migraÃÃo plasmidial idÃntica as duas cepas galleriare citadas à cima. Assim obtivemos 46 cepas com perfil plasmidiais distintos, fazendo desta tÃcnica uma ferramenta Ãtil para discriminar cepas especÃficas, tornando-se valiosa em termos de propriedade intelectual e reivindicaÃÃes. A divergÃncia genÃtica entre 56 cepas foi estimada utilizando ferramenta com base em PCR com primers especÃficos para as seqÃÃncias ERIC e REP. Sendo os fragmentos gerados analisados por eletroforese em gÃis de agarose ou poliacrilamida. As distÃncias genÃticas foram obtidas pelo complemento do coeficiente de Jaccard e os agrupamentos foram realizados pelo mÃtodo UPGMA com aplicaÃÃo de bootstrap para verificar a consistÃncias dos agrupamentos. Uma segunda anÃlise de grupos foi realizada pelo mÃtodo de Tocher. Os primers ERIC e Bc-REP detectaram grande divergÃncia genÃtica entre as 56 cepas de B. thuringiensis com formaÃÃo de 21 grupos quando considerado um ponto de corte de 60%. Entre estes houve valores de bootstrap acima de 50% e grupos com valores de bootstrap abaixo de 50%, parece estarem relacionados com nÃmero de bandas, que foram menores nestes casos. Alguns grupos formados com o mÃtodo Tocher estavam de acordo com os grupos obtidos com o agrupamento UPGMA. Aparentemente, alguns dos grupos formados parecem estar relacionados com mortalidade e procedÃncia, necessitando mais estudos para confirmaÃÃo.

ASSUNTO(S)

rep-pcr caracterizaÃÃo molecular bacillus thuringiensis plasmid pattern. perfil plasmidial rep-pcr bacillus thuringiensis biologia molecular molecular characterization

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