Avaliação de condições de manutenção e criopreservação do cultivo in vitro de células IDE 8.

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2005

RESUMO

O cultivo contínuo da linhagem de células IDE8, derivada de células embrionárias do carrapato Ixodes scapularis, representa uma ferramenta de pesquisa de grande importância no estudo de patógenos transmitidos por carrapatos aos humanos e animais. Apesar do êxito de eu uso em infecções in vitro de algumas espécies de riquétsias por outros grupos de pesquisa, pouco se conhece sobre a sua biologia, as melhores condições de manutenção e criopreservação. Considerando a inexistência dessa linhagem no Brasil, o presente estudo teve como objetivo definir as condições de cultivo, otimizando a manutenção, expansão e preservação da linhagem IDE8 nas condições brasileiras, visando a sua proposição como modelo in vitro para crescimento e multiplicação de amostras brasileiras de riquétsias e outros hemoparasitas. A partir de um frasco contendo células IDE8 em suspensão, foram cultivadas réplicas utilizando-se um sistema aberto (placas de 24 orifícios) e dois sistemas fechados (tubos de 2 ml e frascos de 25 cm2 ) e em um segundo experimento avaliou-se a suplementação de culturas de IDE8 com dois soros fetais bovinos (SFB) de origens distintas (nacional e importado). Em um terceiro experimento avaliou-se a estocagem sob refrigeração a 4°C por períodos de até 60 dias como método de preservação de culturas e finalmente foram avaliadas três técnicas de criopreservação em nitrogênio líquido utilizando-se dois crioprotetores (DMSO e glicerina). Em todos os experimentos os cultivos foram mantidos com trocas semanais do meio e repiques (subcultivos) a cada 15 dias e o desempenho das culturas e de seus respectivos repiques foi avaliado através do percentual de viabilidade e morfologia celular. Os resultados mostraram que células IDE8 se adaptam bem aos dois sistemas de cultivo (aberto e fechado) podendo ser cultivadas nos três tipos de recipientes placas de 24 orifícios, tubos de 2 ml e frascos de 25 cm2 ). Quanto à suplementação de soro fetal bovino, os resultados indicam que o SFB nacional pode ser utilizado em substituição ao importado, já que não foram observadas diferenças significativas (p<0,05) entre as viabilidades dos cultivos. A estocagem sob refrigeração a 4°C mostrou ser um método eficaz de preservação das células IDE8 por pelo menos até 60 dias, resultando em cultivos com elevada viabilidade celular. A técnica de congelamento lento-gradual em nitrogênio líquido, utilizando o DMSO como crioprotetor, foi o único processo eficaz e confiável para a criopreservação de células IDE8. Concluiu-se que o cultivo da linhagem IDE8 é um sistema contínuo in vitro viável, confiável e perfeitamente adaptado às condições brasileiras, disponibilizando um modelo experimental para o estudo das várias hemoparasitoses animais e humanas em nosso país.

ASSUNTO(S)

criopreservação de órgãos, tecidos, etc. teses carrapato teses

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