Avaliação da participação das células NK (células CD56+) na resposta ao paracoccidioides brasiliensis / Evaluation of the role of natural killer cells (CD56+ cells) in the immunological response against paracoccidioides brasiliensis infection

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

19/08/2010

RESUMO

Tradicionalmente o papel das células NK na resposta imunológica tem sido associado com a resistência à infecção viral e tumores, porém estudos recentes apontam para a participação destas células na resposta imunológica contra outras doenças infecciosas. O objetivo deste estudo foi avaliar a possível participação de células NK (CD56+CD3-) na resposta imunológica ao fungo Paracoccidioides brasiliensis. Foram utilizadas células CD56+ isoladas por meio imunomagnético provenientes de pacientes com paracoccidioidomicose e de indivíduos controle. As células CD56+ foram avaliadas quanto à capacidade citotóxica direta contra leveduras de P. brasiliensis (cepa virulenta – Pb18 e avirulenta – Pb265) e contra células-alvo (monócitos) infectadas com leveduras de ambas as cepas. Também foi avaliada a expressão dos constituintes dos grânulos citotóxicos (granzima A, B, perforina e granulisina), receptores de ativação (NKG2D) e de inibição (KIR2DL2/L3/S2 e KIR3DL1), marcadores de ativação (CD69 e CD25), assim como a produção de citocinas (IFN-g e TNF-a) por meio de PCR em tempo real e por citometria de fluxo. A participação da IL-15 na ativação das células NK foi avaliada pela adição da citocina recombinante em alguns experimentos. Para avaliar a participação dos grânulos na atividade citotóxica direta e contra células-alvo em alguns experimentos as células foram tratadas com inibidores específicos (SrCl, concanamicina A ou EGTA). Os resultados demonstraram que células de pacientes apresentam resposta citotóxica (direta e contra células-alvo) inferior àquela observada nos indivíduos controle. A citotoxicidade direta foi dependente de grânulos, mas independente de perforina, enquanto que a citotoxicidade contra células-alvo foi dependente de perforina. A expressão de granulisina (RNAm e proteína) foi maior nas células de indivíduos controle. Além disso, observamos que células CD56+ apresentam a capacidade de secretar essa proteína após o estímulo com leveduras de P. brasiliensis. Também observamos que as células CD56+ de doadores normais são ativadas (aumentam a expressão de CD69 e CD25) quando estimuladas com o fungo, enquanto as células NK de pacientes não mostraram esse aumento, a não ser quando estimuladas com IL-15. Estes resultados demonstraram que as células CD56+ podem participar ativamente da resposta imunológica contra o P. brasiliensis, podendo contribuir tanto para a morte direta do fungo como de células infectadas, e que a granulisina pode desempenhar um papel preponderante no controle da infecção pelo P. brasiliensis. Outro fato importante observado foi que as células CD56+ quando estimuladas por células leveduriformes de P. brasiliensis produzem e secretam IFN-g, uma citocina com atuação importante na ativação de outras células do sistema imunológico como macrófagos e linfócitos, e dessa forma pode contribuir para o desenvolvimento da resposta imunológica adquirida subseqüente à infecção.

ASSUNTO(S)

paracoccidioidomicose citocinas paracoccidioidomycosis cytokines killer cells natural

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