Aplicação da reação em cadeia da polimerase (PCR) e amplificação aleatória de DNA polimórfico (RAPD-PCR) na detecção e identificação de Leptospira sp

AUTOR(ES)

Isabela Farnezi Veloso

FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

20/01/1999

RESUMO

A leptospirose possui importância econômica, pois é uma das principais doenças infecto-contagiosas que afetam várias espécies de animais. Para realização da PCR com os iniciadores Lep13/Lep14 na detecção de Leptospira sp foram utilizados três métodos de extração de DNA. Sete amostras submetidas à extração utilizando proteinase K produziram resultado positivo após a PCR. Quatro amostras submetidas à extração com proteinase de origem vegetal (E6870) também produziram resultado positivo após a PCR. Quando o DNA de cinco amostras foi extraído pelo método de aquecimento, apenas em duas foi possível observar amplificação após a PCR. Foram feitas diluições seriadas de L. hardjo/Hardjoprajitno (CTG) em urina e apos realização da PCR com os, iniciadores Lep13/Lep14 foi possível detectar ate 10²céls/mL. Foi utilizada, também, a técnica de RAPD-PCR com os iniciadores B11/B12 para a diferenciação entre as sorovariedades bratislava, tarassovi, pomona, szwajizak, hardjo/Hardjoprajitno (OMS), hardjo/Hardjoprajitno (CTG) e mini, como também para caracterização de diluições de L. hardjo/Hardjoprajitno (CTG) em urina. No primeiro caso, foi obtido, após a RAPD-PCR, um perfil de bandas diferenciado e característico e, com isso, foi possível identificar cada amostra testada. No segundo caso, foi possível detectar amplificação de até 10 4céls/mL. Os resultados obtidos demonstram que a PCR pode ser utilizada na detecção de Leptospira sp em amostras de urina e a RAPD-PCR pode ser utilizada na identificação, caracterização e diferenciação de sorovariedades.

ASSUNTO(S)

leptospirose em animais teses. leptospirose vacina teses. leptospira identificação teses.

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