Análise proteômica comparativa entre neutrófilos quiescentes e estimulados com fator de agregação plaquetária (PAF)

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

Os neutrófilos humanos são celulas já diferenciadas do sangue periférico, constituindo 40-70% dos leucócitos na circulação em condições normais. É o o primeiro tipo celular a atingir o local da infecção. Eles possuem 3 fenótipos diferentes: quiescente, estimulado e ativado. Várias moléculas pró-inflamatórias podem causar estimulação e ativação dos neutrófilos, incluíndo o mediador lipídico pró-inflamatório PAF. O PAF tem potentes efeitos diretos sobre o neutrófilo e pode induzir quimiotaxia, polimerização de actina, produção de ROS em pouca quantidade e agregação, além de outras ações de estimulação. Nesse estudo, os neutrófilos foram purificados a partir do sangue venoso periférico de voluntários sadios, obtidos após centrifugação do sangue total pelo gradiente de percoll (pureza >97% e viabilidade >98%). 107 células foram estimuladas com 20 nM de PAF por 30 minutos. As análises citométricas mensuraram a explosão respiratória, viabilidade e pureza dos neutrófilos. Foram preparados géis bidimensionais de extratos de neutrófilos quiescentes e estimulados por PAF, comparados seus mapas proteômicos e identificadas proteínas por PMF e MS/MS. A análise comparativa dos géis 2D entre as condições revelou 108 spots com expressão diferencial, sendo que 66 spots representam um aumento na expressão protéica após estimulação pelo PAF e 42 representam diminuição (p0,05). Além disso, 114 spots foram considerados como pertencentes apenas ao mapa do gel quiescente e 129 spots exclusivos do mapa neutrofílicos estimulados por PAF. Forma identificados 50 proteínas, sendo 3 com aumento de expressão após estimulação, 2 com diminuição de expressão, 1 exclusiva da condição quiescente e 42 sem expressão diferencial. Proteínas com aumento de expressão foram: vimentina, filamento intermediário, um componente do citoesqueleto; tubulina beta, uma proteína presente nos microtúbulos, também considerada um componente do citoesqueleto e SNAP-α, uma proteína envolvida no processo de fusão dos grânulos à membrana plasmática. Proteínas que diminuíram a expressão: subunidade 5 da Arp 2/3, proteína que muda a direção da polimerização da actina e proteína S10A9-humana com possível função quimiotática. Proteína exclusiva: anexina A5 inibe a ação da fosfolipase A2. O presente estudo representa uma importante etapa para se compreender as vias de estimulação dos neutrófilos durante o processo inflamatório.

ASSUNTO(S)

neutrófilos estimulados fator de agregação plaquetária (paf) citometria de fluxo e proteômica neutrófilo ciencias biologicas

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