Análise da citotoxicidade do hipoclorito de sódio a 1%, do digluconato de clorexidina a 2% e do endoquil e seus efeitos na liberação de citocinas e óxido nítrico em culturas de macrófagos murinos / Cytotoxicity analysis of 1% sodium hypochlorite, of 2% chlorhexidine digluconate and of Endoquil and its effects on release of cytokine and nitric oxide in cultured murine macrophages

Danieli Colaço Ribeiro Siqueira

Avaliou-se a citotoxicidade do hipoclorito de sódio a 1%, do digluconato de clorexidina a 2% e do Endoquil e seus efeitos na liberação de citocinas e de óxido nítrico em culturas de macrófagos peritoniais murinos. As substâncias sofreram diluições de 1.000 e 10.000 vezes: Grupo Controle, meio de cultura meio McCoy`s 5A® modificado e apirogênico; Grupo Hipoclorito de sódio a 1% (diluições A 0,001 e B 0,0001); Grupo Digluconato de Clorexidina a 2% (diluições A 0,002 e B 0,0002); Grupo Endoquil a 10% (diluições A 0,01 e B 0,001). Foram utilizados 70 camundongos da linhagem C57Bl/6j fêmeas. Após anestesia e sacrifício realizou-se a coleta do exudato celular por meio da injeção e aspiração de meio McCoy`s 5A® modificado na cavidade abdominal dos animais. O ensaio da atividade citotóxica foi realizado pelo Método do MTT nos períodos: curto prazo (4 e 12 horas); médio prazo (24, 48 e 72 horas) e longo prazo (5 e 7 dias). A absorbância dos poços foi lida em Leitora de Elisa a 550 nm. Os valores obtidos foram comparados com os valores do padrão, calculando-se assim a viabilidade e o número de células presentes de cada grupo avaliado em função do tempo. A quantificação in vitro das citocinas IL-1, IL-1, IL-6 e TNF- foi realizada por meio de imunoensaio do tipo Elisa, utilizando-se kit Quantikine® M murine. A análise da síntese de óxido nítrico foi conduzida segundo a metodologia de Griess, na qual o óxido nítrico é convertido a nitrito, sendo este último detectado colorimetricamente. Cada grupo experimental foi analisado em dois tempos de observação (24 e 48h), com estímulo de LPS ou não, em duplicatas. Os dados foram submetidos ao teste estatístico de análise de variância e, quando necessário, complementados pelo teste de Tukey. Após 12 horas, o grupo tratado com clorexidina na diluição A apresentou diminuição significativa da viabilidade celular em relação aos grupos tratados com hipoclorito de sódio e Endoquil; este declínio estendeu-se para 24, 48 e 72 horas quando provocou morte celular. Em 5 e 7 dias, ocorreu redução da viabilidade em todos os grupos, com diferença significante para o grupo da clorexidina. Em relação às citocinas e óxido nítrico: o hipoclorito de sódio e a clorexidina induziram a produção e exacerbaram o efeito do LPS sobre as IL-1 e IL-1 , respectivamente, enquanto que o Endoquil diminuiu estes efeitos; a clorexidina inibiu o efeito estimulatório do LPS, diminuindo a síntese de IL- 6; juntamente com o Endoquil, a clorexidina diminuiu a síntese de TNF- , enquanto que o hipoclorito aumentou esta produção em 24 horas; mesmo estimulados com LPS, o hipoclorito e a clorexidina comprometeram a síntese de óxido nítrico, em 24horas e, após 48 horas, apenas a clorexidina manteve a inibição.

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