Análise computacional da cromatina de espermatozóides de galo (Gallus gallus) e determinação do período de armazenamento dos espermatozóides nas espermatecas de galinhas / Computacional analysis of the chromatin of fowls spermatozoa (Gallus gallus) and determination of the storage time of spermatozoa in the sperm storage tubules in fowl hens

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

Os objetivos desse trabalho foram testar novas variantes metodológicas utilizando coloração com azul de toluidina, até se estabelecer um protocolo confiável para a avaliação computacional da compactação da cromatina em espermatozóides de galo, buscar alterações na compactação da cromatina durante o armazenamento dos mesmos na espermateca de galinhas, observar a duração do período de armazenamento e estimar a variação na quantidade de espermatozóides armazenados nos segmentos cranial, médio e caudal da região da espermateca durante 23 dias. Para avaliação computacional da compactação da cromatina, foram utilizadas 20 amostras de sêmen de galo, sendo 10 amostras de galos com 35 semanas de idade (Galos Novos) e 10 amostras de galos com 60 semanas de idade (Galos Velhos). Para a análise dos espermatozóides durante o armazenamento nas espermatecas das galinhas, foram utilizadas 48 matrizes pesadas (44 fêmeas e 4 machos) da linhagem Cobb avian 48 com 36 semanas de idade. Foi coletado material da junção utero-vaginal das fêmeas por 23 dias após a cópula com os machos, sendo que a cada 4 dias, 6 fêmeas foram sacrificadas para confecção de lâminas histológicas da região da espermateca. Foram testados diferentes métodos de desnaturação e coloração com AT, sendo que o melhor foi a hidrólise com ácido clorídrico 1N por 10 minutos, coloração em cubeta com azul de toluidina 0,025%, pH 4,0, por 20 minutos, desidratação em álcool, diafanização em xilol e montagem com bálsamo do Canadá. Todas as amostras de sêmen foram submetidas a este protocolo e posteriormente avaliadas por análise de imagem computacional, onde foram mensuradas as cabeças dos espermatozóides quanto a área, comprimento, largura, perímetro, homogeneidade da compactação da cromatina dentro de cada cabeça e intensidade de compactação da cromatina. Os espermatozóides de galos velhos apresentaram mais alterações na cromatina do que os de galos jovens. Os galos jovens apresentaram cabeças de espermatozóides maiores do que galos velhos. Não foi possível determinar as alterações na compactação da cromatina dos espermatozóides dos galos após o armazenamento na espermateca pelo método utilizado. Foram encontrados espermatozóides por toda a extensão das espermatecas, sendo que esses se concentravam no segmento médio da junção utero-vaginal. Não houve diferença estatística significativa na quantidade de espermatozóides presentes na espermateca no decorrer dos dias de experimento. Foram observadas grandes quantidades de células espermáticas até o 23 dia de coleta. Portanto, o período de armazenamento de espermatozóides em galinhas é de, no mínimo 23 dias.

ASSUNTO(S)

azul de toluidina galo ave doméstica - reprodução toluidine blue cromatina espermateca túbulos de armazenamento de espermatozóides clinica veterinaria chromatin condensation fowl sperm sperm storage tubules utero-vagina junction

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