Alfa Amilase de bacillus subtilis ATCC 601B : produção e propriedades da enzima não purificada

AUTOR(ES)
FONTE

IBICT - Instituto Brasileiro de Informação em Ciência e Tecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

07/08/1990

RESUMO

Foram estudados os efeitos de diferentes concentrações de glicose, amido solúvel, dextrina, lactose, peptona e extrato de levedura sobre a síntese de α-amilase por Bacillus subtilis ATCC 601B por processo em batelada, em meio de cultura básico composto de (KH4)2SO4, MgSO4 * 7H20, KC1, K2HPO4 e CaCl2. Foram estudados os efeitos do pH inicial do meio de cultura e da temperatura de incubação sobre a produção da enzima, e o perfil da síntese enzimática apenas no meio de cultura contendo glicose como fonte de carbono. Os resultados foram discutidos relacionando o crescimento microbiano com a síntese da enzima. Foi observado que a maior produção de α-amilase ocorreu nos meios de cultura contendo glicose a 0,1g/l e 30,0g/l ou dextrina a 10,0g/l. As atividades enzimáticas específicas globais (Emax / Xmax) mostraram que esses resultados se devem a um maior estímulo do crescimento celular em meio de cultura contendo glicose e a um maior estímulo da síntese enzimática em meio de cultura contendo dextrina. Os quatro carboidratos inicialmente adicionados ao meio de cultura causaram inibição catabólita da síntese da enzima. O aumento das atividades enzimáticas específicas globais, observadas em determinadas faixas de concentração inicial dos açúcares, indicam que durante o processo fermentativo há estímulo da síntese de α-amilase devido a formação de metabólitos ou de produtos de degradação do carboidrato. Para a faixa de concentração compreendida entre l,0g/l e 20,0g/l. O estímulo da síntese enzimática foi mais acentuada em meio de cultura contendo dextrina, seguida de amido solúvel, lactose e glicose. Os resultados obtidos para a produtividade global em 72 horas de fermentação também revelaram que a dextrina e a fonte de carbono mais adequada para a produção de α-amilase. Foi observado que as concentrações de peptona e de extrato de levedura mais adequadas para a produção de α-amilase são 10,0g/l e 5,0g/l respectivamente. Os resultados obtidos para as atividades enzimáticas específicas globais mostraram, no entanto, que a peptona afeta basicamente o desenvolvimento microbiano enquanto que o extrato de levedura afeta diretamente a síntese da enzima. Das condições estudadas, a maior produção de enzima é obtida quando o pH inicial do meio de cultura é ajustado a 7,0 e a temperatura de incubação é 37°C. Nessas condições foram obtidas as maiores atividades enzimáticas específicas globais e produtividades globais. O perfil da síntese da α-amilase revelou que houve produção da enzima mesmo na fase logarítmica de crescimento, ocorrendo, porém, com maior intensidade na fase estacionária e de lise celular. Estudos complementares mostraram que a enzima é uma α-amilase com pH ótimo ao redor de 6,4 em solução tampão ácido cítrico - fosfato de sódio, e com temperatura ótima ao redor de 50°C. Além disso, foi observado que ela mantém 100% da sua atividade inicial em solução não dialisada após 25 horas de aquecimento a 37°C. A enzima se mostrou pouco estável a 80°C, tendo sido totalmente inativada após 10 minutos de aquecimento a essa temperatura. O cálcio e o amido estabilizaram a enzima acentuadamente e a sua ação hidrolítica sobre o amido produz polímeros de glicose com duas ou mais unidades do açúcar

ASSUNTO(S)

enzimas - aplicações industriais alimentos

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