A multicommuted flow procedure for the determination of total and free cholesterol in eggs and human blood serum by chemiluminescence
AUTOR(ES)
Leite, Oldair D, Vieira, Heberth J, Fatibello-Filho, Orlando, Rocha, Fábio R. P
FONTE
Journal of the Brazilian Chemical Society
DATA DE PUBLICAÇÃO
2010
RESUMO
Um sistema de análises em fluxo com multicomutação com detecção por quimiluminescência foi desenvolvido para a determinação de colesterol livre e total sem alterações no módulo de análises. Colesterol estearase e colesterol oxidase foram imobilizadas em esferas de vidro via glutaraldeído/3-aminopropiletoxisilano e mini-colunas contendo as enzimas foram usadas para tratamento das amostras em linha. Ésteres de colesterol foram clivados a colesterol e ácidos graxos na coluna empacotada com colesterol estearase. No reator contendo colesterol oxidase, o analito foi convertido a 4-colesten-3-ona e peróxido de hidrogênio. A detecção foi baseada na quimiluminescência produzida por H2O2 no sistema hexacianoferrato(III)-luminol. Os efeitos de variáveis químicas e hidrodinâmicas sobre o sinal de quimiluminescência foram avaliados. As curvas analíticas foram lineares entre 250 e 2500 mg L-1 e 500 e 4000 mg L-1, para colesterol livre e total, respectivamente. Limites de detecção para ambos os analitos foram estimados em 60 mg L-1 (99,7% de confiança). A frequência de amostragem foi de 55 h-1 e o consumo de reagentes foi de 350 µg de luminol e 2,6 mg de hexacianoferrato(III) de potássio por determinação. O procedimento desenvolvido foi aplicado à determinação de colesterol em ovos e soro sanguíneo humano gerando resultados concordantes com o procedimento espectrofotométrico de referência com nível de confiança de 95%.
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