Purification, characterization and structural determination of UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase produced by Moniliophthora perniciosa

AUTOR(ES)

Santos Junior, Manoelito C., Gonçalves, Priscila A., Taranto, Alex G., Koblitz, Maria G. B., Góes-Neto, Aristóteles, Pirovani, Carlos P., Cascardo, Júlio C. M., Cruz, Sandra H. da, Zingali, Russolina B., Pereira, Gonçalo A. G., Dias, Cristiano V., Assis, Sandra A. de

FONTE

Journal of the Brazilian Chemical Society

DATA DE PUBLICAÇÃO

2011-06

RESUMO

A enzima UDP-N-acetilglicosamina pirofosforilase de Moniliophthora perniciosa (CCMB 0257), o fungo patogênico causador da doença vassoura-de-bruxa do Theobroma cacao, foi parcialmente purificada por precipitação com sulfato de amônio e cromatografia de gel filtração em Sephacryl S-200. O tampão de extração da enzima foi o fosfato de sódio, 0,050 mol L-1, pH 7,0, contendo 1,0 mol L-1 de NaCl. A metodologia de superfície de resposta (MSR) foi usada para a obtenção do pH e temperatura ótima. Os resultados mostraram quatro diferentes isoenzimas (PyroMp I, PyroMp II, PyroMp III e PyroMp IV) que apresentaram pH ótimo na faixa de 6,9-8,4 e temperatura ótima variando entre 28 a 68 °C. A estrutura 3D de pirofosforilase de M. perniciosa foi obtida por modelagem comparativa. O modelo obtido mostrou uma boa qualidade, possuindo 78,6% de aminoácidos nas regiões energeticamente favoráveis. O modelo foi então submetido a simulações de dinâmica molecular (DM). O modelo apresentou uma boa qualidade geométrica após as simulações de DM (91,1% -gráfico de Ramachandran). A procura pelo sítio ativo da enzima mostrou que este é mantido extremamente conservado. Este modelo pode ser útil para desenvolvimento de inibidores contra a doença vassoura de bruxa.

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